[發明專利]一種基于吩噻嗪可逆熒光探針的設計合成及性質研究

在審

• 申請號: 202111168607.7
• 申請日: 2021-10-08
• 公開（公告）號: CN113735796A
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 夏艷;毛曉杰;侯瑞斌
• 申請（專利權）人: 長春工業大學
• 主分類號: C07D279/22
• 分類號: C07D279/22;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于吩噻嗪可逆熒光探針的合成及性質研究，其特征在于，所述的熒光分子探針的化學結構式如下所示：。

2.如權利要求1所述的一種基于吩噻嗪可逆熒光探針的合成，其特征在于，所述熒光分子探針的制備方法包括以下步驟：步驟1為化合物10-乙基-10 H-吩噻嗪的制備:將吩噻嗪加入DMSO中，向體系內加入適量氫化鈉混合攪拌0.5小時，再將與吩噻嗪同摩爾比的溴乙烷加入體系內，氮氣保護室溫下反應24小時，待反應結束后萃取干燥，除去溶劑，柱層析得到目標物；步驟2為化合物10-乙基-10 H-吩噻嗪-3-甲醛的制備：將適量10-乙基-10 H-吩噻嗪溶于1，2-二氯乙烷，向體系滴加入Vilsmeier-Haack試劑，氮氣保護攪拌回流12小時，反應結束后加入蒸餾水使其淬滅，調節pH至中性，萃取干燥，除去溶劑，柱層析得到目標物；步驟3探針(E)-2-氰基-3-(10-乙基-10 H-吩噻嗪-3-基)-N，n-二甲基丙烯酰胺的制備：將適量10-乙基-10 H-吩噻嗪-3-甲醛溶于乙醇，加入同摩爾比的2-氰基-N，N-二甲基乙酰胺，加入哌啶，氮氣保護攪拌回流8小時，待反應結束后萃取干燥，除去溶劑，柱層析得到目標物。

3.如權利要求1所述的一種基于吩噻嗪可逆熒光探針的應用，其特征在于，對Cys、Hcy、GSH的區分方法如下：含有1% DMSO的PBS（pH=7.4）緩沖溶液中探針（10 μM）對Cys (200 μM)、Hcy (15 μM)和GSH (5 mM)響應35 min后，從紫外吸收光譜中可以看出探針對Cys和Hcy幾乎無明顯變化，而對GSH有很明顯的響應，波長為310 nm和435 nm處的峰有明顯的下降；探針與GSH反應后，探針的熒光強度發生了明顯的下降，而探針對Cys和Hcy幾乎無明顯變化。

4.如權利要求1所述的一種基于吩噻嗪可逆熒光探針的應用，其特征在于，探針與GSH的滴定及檢測線測定如下：在GSH濃度范圍0-10 mM內，監測探針（10 μM）與GSH在（1-10 mM）在 PBS (pH 7.4，1% DMSO)中反應后606 nm處的熒光強度；隨著GSH濃度的增加，在606 nm處發射峰的熒光強度也隨之減弱；根據測試結果，將探針與GSH濃度(0-5 mM)進行線性擬合，發現在GSH的濃度小于5 mM時，熒光強度與GSH濃度呈線性關系，直線方程為y=-147.11x+764.89；當GSH濃度達到5mM之后，熒光強度保持在相對穩定的范圍內，幾乎沒有熒光強度變化，并計算出其對GSH的最低檢測極限為1.07 μM（細胞中GSH為0-10 mM）。