[發(fā)明專利]一種從發(fā)酵液中分離純化精氨酸脫羧酶的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202111164267.0
• 申請日: 2021-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN113913417A
• 公開（公告）日: 2022-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 岳明瑞;謝沛;曹華杰;郭永勝
• 申請（專利權(quán)）人: 新泰市佳禾生物科技有限公司;汕頭市佳禾生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/88
• 分類號(hào): C12N9/88;C12N1/21;C12N15/60;C12N15/75;C12R1/125
• 代理公司: 濟(jì)南譽(yù)豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè)) 37240
• 代理人: 李茜

1.一種從發(fā)酵液中分離純化精氨酸脫羧酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將含有精氨酸脫羧酶的發(fā)酵液的pH值調(diào)至4.2～4.6，然后依次經(jīng)活性炭脫色和陶瓷膜過濾，收集濾液；

(2)將濾液用鎳柱進(jìn)行親和層析，濾液掛柱后先用凝血酶溶液進(jìn)行酶切，再進(jìn)行洗脫，收集洗脫液即為混合液；

(3)混合液過苯甲瞇-瓊脂糖凝膠樹脂進(jìn)行洗脫，收集洗脫液再進(jìn)行電滲析脫鹽，最后濃縮、干燥，得到精氨酸脫羧酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，陶瓷膜的孔徑為100nm，壓力0.5MPa。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，濾液掛柱所用的結(jié)合緩沖液為50mM的PBS。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，酶切所用消化緩沖液為150mMNaCl，ph7.0，消化溫度30℃，切割10h。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述凝血酶溶液是將凝血酶溶于生理鹽水制得的；所述凝血酶的酶活為2000000U、比活大于2000U/mgpr。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述凝血酶的用量：1mg精氨酸脫羧酶用2U凝血酶切割。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，洗脫所用洗脫劑為生理鹽水。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，洗脫所用平衡緩沖液為50mMTris-HCl，0.5M NaCl，pH7.4；洗脫所用結(jié)合緩沖液為50mM Tris-HCl，0.5M NaCl，pH7.4100cm/h，壓力為0.3MPa。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述電滲析脫鹽的pH控制在5.7～6.1，溫度控制在40℃以下，淡室電導(dǎo)≤1000μs/cm時(shí)電滲析結(jié)束。