[發(fā)明專利]一種基于DNAzyme調(diào)控基因編輯的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111160432.5 | 申請日： | 2021-09-30 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN113897397A | 公開（公告）日： | 2022-01-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 周文虎;董麗萍 | 申請（專利權(quán)）人： | 中南大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/87 | 分類號(hào)： | C12N15/87;C12N9/22;C12N15/113;C07K14/435 |
| 代理公司： | 長沙軒榮專利代理有限公司 43235 | 代理人： | 李崇章 |
| 地址： | 410000 湖南*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 dnazyme 調(diào)控 基因 編輯 方法 | ||
1.一種基于DNAzyme調(diào)控基因編輯的方法，其特征在于，所述方法具體包括：
將CRISPR/Cas9系統(tǒng)中的gRNA的5’末端進(jìn)行延長，獲得含有5’末端延長片段的gRNA前體；
根據(jù)所述gRNA前體的堿基序列設(shè)計(jì)8-17DNAzyme底物結(jié)合臂的序列，獲得與gRNA前體形成堿基互補(bǔ)配對的8-17DNAzyme；
將所述gRNA前體和8-17DNAzyme作為調(diào)控CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)原料，通過是否加入金屬離子對基因編輯進(jìn)行調(diào)控。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于DNAzyme調(diào)控基因編輯的方法，其特征在于，所述gRNA的5’末端進(jìn)行延長過程中延長的長度為13-15個(gè)堿基。
3.根據(jù)利要求1所述的基于DNAzyme調(diào)控基因編輯的方法，其特征在于，所述gRNA前體5’末端的延長片段與所述gRNA連接在一起沒有潛在的發(fā)夾結(jié)構(gòu)和互補(bǔ)配對情況。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于DNAzyme調(diào)控基因編輯的方法，其特征在于，所述金屬離子包括：錳離子、鎂離子。
5.權(quán)利要求1-4任意所述的基于DNAzyme調(diào)控基因編輯的方法在調(diào)控增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因表達(dá)中的應(yīng)用，其特征在于，所述增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的特異性gRNA、gRNA前體和8-17DNAzyme的基因序列如序列SEQ ID NO:1-3所示。
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