[發明專利]基于TaHDA9-2A基因中A6886G SNP位點輔助篩選不同千粒重小麥的方法

在審

• 申請號: 202111157624.0
• 申請日: 2021-09-30
• 公開（公告）號: CN115873968A
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 鄭術芝;趙偉雙;白蛟騰;耿子越;牛艷肖
• 申請（專利權）人: 河北師范大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 閆書寧

1.一種篩選或輔助篩選不同千粒重小麥的方法，包括如下步驟：檢測待測小麥基于TaHDA9-2A基因的基因型為基因型I還是基因型II，基因型I小麥的千粒重基因型II小麥的千粒重；

所述基因型I的小麥為基于A6886G SNP位點的基因型為AA純合型的小麥；

所述基因型II的小麥為基于A6886G SNP位點的基因型為GG純合型的小麥；

所述A6886G SNP位點為小麥基因組中SEQ ID NO:1自5’末端起的第6886位核苷酸。

2.一種篩選或輔助篩選不同千粒重小麥的方法，依次包括如下步驟：

(A1)以待測小麥的基因組DNA為模板，采用引物F1和引物R1組成的引物對甲進行PCR擴增，得到PCR擴增產物P1；

(A2)以所述PCR擴增產物P1為模板，采用引物F2和引物R2組成的引物對乙進行PCR擴增，得到PCR擴增產物P2；

(A3)將所述PCR擴增產物P2用限制性內切酶EcoRV進行酶切，得到酶切產物；然后進行如下評判：如果所述酶切產物為一條DNA片段，則待測小麥基于TaHDA9-2A基因的基因型為基因型I；如果所述酶切產物為兩條DNA片段，則待測小麥基于TaHDA9-2A基因的基因型為基因型II；

基因型I的小麥的千粒重基因型II的小麥的千粒重；

所述引物F1為SEQ ID NO:4所示的單鏈DNA分子；

所述引物R1為SEQ ID NO:5所示的單鏈DNA分子；

所述引物F2為SEQ ID NO:6所示的單鏈DNA分子；

所述引物R2為SEQ ID NO:7所示的單鏈DNA分子。

3.一種篩選或輔助篩選不同千粒重小麥的方法，依次包括如下步驟：

(B1)以待測小麥的基因組DNA為模板，采用引物F1和引物R1組成的引物對甲進行PCR擴增，得到PCR擴增產物P1；

(B2)以所述PCR擴增產物P1為模板，采用引物F2和引物R2組成的引物對乙進行PCR擴增，得到PCR擴增產物P2；

(B3)將所述PCR擴增產物P2用限制性內切酶EcoRV進行酶切，得到酶切產物；然后進行如下評判：如果所述酶切產物中只具有100bp的DNA片段，則待測小麥基于TaHDA9-2A基因的基因型為基因型I；如果所述酶切產物中只具有75bp的DNA片段和25bp的DNA片段，則待測小麥基于TaHDA9-2A基因的基因型為基因型II；

基因型I的小麥的千粒重基因型II的小麥的千粒重；

所述引物F1為SEQ ID NO:4所示的單鏈DNA分子；

所述引物R1為SEQ ID NO:5所示的單鏈DNA分子；

所述引物F2為SEQ ID NO:6所示的單鏈DNA分子；

所述引物R2為SEQ ID NO:7所示的單鏈DNA分子。

4.一種篩選或輔助篩選不同千粒重小麥的方法，依次包括如下步驟：

(B1)以待測小麥的基因組DNA為模板，采用引物F1和引物R1組成的引物對甲進行PCR擴增，得到PCR擴增產物P1；

所述引物F1為SEQ ID NO:4所示的單鏈DNA分子；

所述引物R1為SEQ ID NO:5所示的單鏈DNA分子；

(2)將所述PCR擴增產物P1進行測序，然后進行如下評判：

如果所述PCR擴增產物P1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2自5’末端起第6562-7444位所示，則待測小麥基于TaHDA9-2A基因的基因型為基因型I；

如果所述PCR擴增產物P1的核苷酸序列如SEQ ID NO:3自5’末端起第6562-7444位所示，則待測小麥基于TaHDA9-2A基因的基因型為基因型II；

基因型I的小麥的千粒重基因型II的小麥的千粒重。