[發明專利]拉沙洛菌素和鹽霉素單鏈抗體和雙特異性單鏈抗體及其應用

有效

• 申請號: 202111155986.6
• 申請日: 2021-09-29
• 公開（公告）號: CN113896798B
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 李建成;馬月姣;陳瑩嫻;黃婧潔;李苗
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C12N15/70;G01N33/53;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 張羽

本發明公開了拉沙洛菌素和鹽霉素單鏈抗體和雙特異性單鏈抗體及其應用。該雙特異性單鏈抗體含有名稱為LAS?VH的LAS重鏈可變區、名稱為SAL?VH的SAL重鏈可變區、名稱為LAS?VL的LAS輕鏈可變區和名稱為SAL?VL的SAL輕鏈可變區，所述LAS?VH、SAL?VH、LAS?VL和SAL?VL均由決定簇互補區和框架區組成；所述決定簇互補區均由CDR1、CDR2和CDR3組成。該雙特異性單鏈抗體可用于檢測鹽霉素和拉沙洛菌素殘留。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及拉沙洛菌素和鹽霉素單鏈抗體和雙特異性單鏈抗體及其應用。

背景技術

拉沙洛菌素(Lasalocid，LAS)屬雙價聚醚離子載體抗生素，其化學結構式如圖1所示，除用于防治雞球蟲病外，還可用于防治火雞、羔羊和犢牛球蟲病。其抗球蟲機理為捕獲或釋放雙價陽離子，影響蟲體離子平衡，造成蟲體破裂死亡，拉沙洛菌素對球蟲子孢子以及第1代、第2代無性周期的子孢子、裂殖子均有明顯抑殺作用。鹽霉素(Salinomycin，SAL)為一元羧酸聚醚類動物專用抗生素，其化學結構式如圖2所示，對大多數革蘭氏陽性菌和各種球蟲有較強的抑制和殺滅作用，用于豬可防治腹瀉、促生長、提高成活率，主要用于家禽防球蟲。由于兩種藥物具有用量小且廣譜高效、耐藥性低和促進生長等優點，被廣泛用作飼料添加劑來預防和治療家禽的球蟲病，但二者也有潛在的毒性作用，安全范圍較窄，且與泰妙菌素、四環素類和磺胺類的某些抗生素還存在配伍禁忌。因此LAS和SAL在使用時，既要注意其本身的毒性作用和配伍禁忌，還要極度關注二者的殘留問題。我國已批準的動物性食品中拉沙洛菌素最高殘留限量為：牛肝臟0.7μg/mL、雞脂肪1.2μg/mL、雞和火雞肝臟0.4μg/mL、火雞脂肪0.4μg/mL、羊肝臟1μg/mL、兔肝臟0.7μg/mL；鹽霉素最高殘留限量為：雞肉0.6μg/mL、雞脂肪1.2μg/mL、雞肝臟1.8μg/mL。

目前拉沙洛菌素和鹽霉素殘留檢測方法眾多，使用最成熟最普遍的殘留分析方法仍然是儀器方法，但是，獸藥殘留儀器分析這一檢測方法本身存在一定的制約條件，比如成本昂貴的儀器、前處理方法要求較高且耗時費力、樣品處理量較少等，因此新穎的獸藥殘留快速檢測技術的開發也迫在眉睫，免疫試劑盒和試紙條等已成為快速檢測的重點方向。

發明內容

本發明的目的之一在于提供拉沙洛菌素和鹽霉素的雙特異性單鏈抗體或其抗原結合部分。

本發明提供了拉沙洛菌素和鹽霉素的雙特異性單鏈抗體或其抗原結合部分，所述雙特異性單鏈抗體或其抗原結合部分含有名稱為LAS-VH的LAS重鏈可變區、名稱為SAL-VH的SAL重鏈可變區、名稱為LAS-VL的LAS輕鏈可變區和名稱為SAL-VL的SAL輕鏈可變區，所述LAS-VH、SAL-VH、LAS-VL和SAL-VL均由決定簇互補區和框架區組成；所述決定簇互補區均由CDR1、CDR2和CDR3組成；

所述LAS-VH的CDR1的氨基酸序列如SEQ?ID?No.4中第25位-第34位所示；

所述LAS-VH的CDR2的氨基酸序列如SEQ?ID?No.4中第50位-第58位所示；

所述LAS-VH的CDR3的氨基酸序列如SEQ?ID?No.4中第95位-第108位所示；

所述SAL-VH的CDR1的氨基酸序列如SEQ?ID?No.4中第274位-第282位所示；

所述SAL-VH的CDR2的氨基酸序列如SEQ?ID?No.4中第299位-第308位所示；

所述SAL-VH的CDR3的氨基酸序列如SEQ?ID?No.4中第345位-第358位所示；

所述LAS-VL的CDR1的氨基酸序列如SEQ?ID?No.4中第401位-第413位所示；

所述LAS-VL的CDR2的氨基酸序列如SEQ?ID?No.4中第429位-第433位所示；