[發明專利]一種基于mSNP技術檢測白蘿卜種子純度的混樣檢測方法

在審

• 申請號: 202111154515.3
• 申請日: 2021-09-29
• 公開（公告）號: CN113755628A
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 劉田;許彥芬;高苗;李凝;張叢;張萌;郝軍會;龔舒;劉景藝
• 申請（專利權）人: 石家莊博瑞迪生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 北京德崇智捷知識產權代理有限公司 11467
• 代理人: 郜彥茹

本發明涉及一種基于mSNP技術檢測白蘿卜種子純度的混樣檢測方法，其利用引物對1F/R～20F/R進行，所述引物對1F/R～20F/R的基因序列見SEQ ID No.1～40；本發明采用mSNP技術，在擴增子不變的情況下，可以檢測到更多的SNP變異；采用混樣的方法進行檢測，在減少擴增工作量的同時降低了測序成本，也加快了檢測速度，可在一天時間內最多完成1440粒種子的檢測。本方法是利用測序技術直接讀取單核苷酸多態，通過程序直接進行純度結果的判讀，結果直觀，可靠，避免受種子發育期、及結果判讀時主觀因素的影響。

技術領域

本發明屬于種子純度檢測領域，具體涉及一種基于mSNP技術檢測白蘿卜種子純度的混樣檢測方法。

背景技術

白蘿卜是十字花科蘿卜屬一年生作物，染色體數目18對，營養成分豐富，在世界各地均有種植，開發價值較大。中國是白蘿卜的發源地，是我國重要的蔬菜之一，已有2700年以上的栽培歷史，具有豐富的種質資源。

隨著市場種子產業的興起，種子產品日漸豐富，種子的生產經營單位也越來越多，市場上種子純度問題普遍存在，嚴重干擾市場秩序。種子純度為本品種的種子數占供檢本作物樣品種子數的百分率。為對種子進行有效區分，保證種子純度，在蘿卜雜交種的新品種推廣中一般要試種一季，通過田間種植的方法確定雜交種的純度之后才能在市場上推廣應用，這個過程不僅增加了田間管理和儲藏成本，而且延誤了種子上市的時機。為了加快優質種質的上市，促進蘿卜產業的發展，對快速準確的的種子純度鑒定方法有迫切的需求。

種子純度鑒定經過形態學、生物化學水平，已經進入了DNA水平的研究水平。DNA分子標記信息量大、遺傳性穩定、不易受內外環境影響、可以直接反映DNA在分子水平上的遺傳變異、對所需的DNA樣品量較少、操作方便，是可用于應用的理想的檢測方法。得益于DNA分子標記的諸多優點，近年來在作物領域如水稻、小麥等物種的種子純度鑒定中應用已經比較廣泛。常用的分子標記RAPD、SSR、RFLP等；RFLP是最早出現的第一代分子標記，優點是遺傳信息豐富、穩定性和重復性較好；缺點是費時、對DNA樣本的質量要求高、需要用到放射性探針等。SSR標記的優點是重復性高、多態豐富、共顯性、操作簡單；缺點是引物設計及篩選工作量較大，成本較高。RAPD標記優點是操作靈活、所需的DNA樣品少、操作方便；缺點是對實驗條件依賴度高，影響結果的可靠性。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種基于mSNP技術檢測白蘿卜種子純度的混樣檢測方法，其高效、準確、成本低。

為了實現上述目的，本發明采取的技術方案如下：

技術方案一：

一種于mSNP技術的白蘿卜種子純度檢測的引物組，其特征在于，其包括引物對1F/R、引物對2F/R、引物對3F/R、引物對4F/R、引物對5F/R、引物對6F/R、引物對7F/R、引物對8F/R、引物對9F/R、引物對10F/R、引物對11F/R、引物對12F/R、引物對13F/R、引物對14F/R、引物對15F/R、引物對16F/R、引物對17F/R、引物對18F/R、引物對19F/R、引物對20F/R；其中每條引物對均由正向引物和反應引物組成；

所述引物對1F/R中，F引物的序列SEQI DNo.1所示，R引物的序列如SEQI DNo.2所示；

所述引物對2F/R中，F引物的序列SEQI DNo.3所示，R引物的序列如SEQI DNo.4所示；

所述引物對3F/R中，F引物的序列SEQI DNo.5所示，R引物的序列如SEQI DNo.6所示；

所述引物對4F/R中，F引物的序列SEQI DNo.7所示，R引物的序列如SEQI DNo.8所示；

所述引物對5F/R中，F引物的序列SEQI DNo.9所示，R引物的序列如SEQI DNo.10所示；