[發明專利]一種結直腸癌診斷標志物及其應用

有效

• 申請號: 202111153541.4
• 申請日: 2021-09-29
• 公開（公告）號: CN113866413B
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發明（設計）人: 李冬;商安全;孫祖俊;王旋;谷晨崢;吳軍錄;權文強
• 申請（專利權）人: 上海市同濟醫院;上海市普陀區人民醫院（上海紡織第一醫院）
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 周春洪

本發明涉及分子生物學技術領域，具體是一種結直腸癌診斷標志物及其應用。本發明通過對結直腸癌患者血漿外泌體進行label?free蛋白質譜的檢測數據處理及分析，得到標準化的蛋白表達譜數據，進而篩選出差異表達的蛋白——CPS1和TNC。之后通過實驗檢測CPS1聯合TNC在結直腸癌與癌旁組織樣本以及患者血清樣本中的表達差異，結果顯示CPS1和TNC在結直腸癌組織中的表達水平均明顯高于癌旁組織中的表達水平，且實驗結果還表明其表達水平與晚期、淋巴結轉移、遠處轉移呈正相關，可以作為結直腸癌早期篩查，預后評估指標。二者聯合使用較單獨其特異性、敏感度均有顯著提升，具有無創、便捷等優點。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體地說，是一種結直腸癌診斷標志物及其應用。

背景技術

結直腸癌(colorectal?cancer，CRC)是最常見的消化道惡性腫瘤之一。據世界衛生組織國際癌癥研究署估計，其發病率、死亡率約占全部惡性腫瘤的前三位。隨著我國近30年經濟和生活的改善，結直腸癌在我國的發病和死亡情況均呈上升趨勢，位居我國惡性腫瘤發病第三位和死亡第五位，嚴重威脅著人們的健康和生命。結直腸癌在全球范圍內具有明顯的地域分布差異，高發地區主要為澳大利亞、新西蘭、歐洲及北美等地區，而在非洲、中南亞等地區發病率較低。研究發現，2010年我國結直腸癌粗發病率為20.90/10萬，中國人口標化率為16.14/10萬；粗死亡率為10.05/10萬，中國人口標化率為7.55/10萬，發病率和死亡率均高于發展中國家的平均水平。大部分結直腸癌患者確診時已處于腫瘤進展期，失去了最佳的治療時機，導致五年生存率不到20％，預后較差。因此，探索結直腸癌快速診斷的評估方法，提高診療水平，提高存活率，是當前研究的熱點和難點。

目前臨床上用于結直腸癌診斷的方法包括：光學檢查和形態學檢查，常規的檢查方法主要有排泄物便潛血檢查、排泄物免疫學檢查、鋇劑雙重造影檢查、彈性乙狀結腸鏡檢查、結腸鏡檢查和CT結腸成像。但是，上述檢測方法仍存在一定局限性，如便潛血檢查分離過程繁瑣，易受細菌、食物及腸道粘液等干擾；結腸鏡檢查對設備和檢測人員技術的要求較高，誤診率較大。

隨著結直腸癌發病機制的研究越來越廣泛，分子生物標記物在其中的重要性越來越明顯。這些標記物已成為結直腸癌診斷和治療的重要靶點。近年來，外泌體在腫瘤中的作用越來越受到重視。外泌體是由不同類型細胞分泌的直徑約30-100nm的脂質雙層膜囊泡。越來越多的證據表明，癌源性外泌體通過轉移和交換致癌分子，包括蛋白質、脂質、核酸(circRNAs、lncRNA、microRNAs、mRNA)、轉錄因子等多種生物功能大分子，在腫瘤細胞間通訊中發揮關鍵作用，從而參與促進腫瘤發生、腫瘤增殖、轉移、血管生成、免疫逃逸。研究發現經常使用的外泌體生物標志物是異質的，并且在不同細胞類型中具有特異性。許多證據證實了癌源性外泌體蛋白質的功能，這些外泌體蛋白向微環境傳遞細胞信號以同步表型模式。有報道稱，外泌體蛋白在血液中是穩定的，有望成為臨床檢測的新型生物標志物。蛋白質除了發揮執行者的作用外，還具有調節免疫系統，清除病毒或微生物病原體感染，惡性腫瘤細胞的轉化等重要功能。因此，我們認為外泌體蛋白可能是一類新的潛在的生物標志物或腫瘤治療靶點。

中國專利申請：201410009149.6公開了一種結直腸癌相關的標志物的應用，該標志物為PPP1R12A。具體地講，該標志物的DNA相對拷貝數與結直腸癌患者化療之后的生存期呈負相關。本發明還涉及結直腸癌組織樣本中檢測PPP1R12A的試劑盒、方法和應用。該試劑盒中含有檢測PPP1R12A和內參基因GAPDH引物對，本發明通過研究發現了PPP1R12A與結直腸癌以及結直腸癌化療療效之間的關系，設計出檢測PPP1R12A的引物對，用該引物對設計出的試劑盒能夠用于檢測結直腸癌腫瘤，使通過PPP1R12A檢測結直腸癌成為可能。