[發明專利]以磁性淀粉為載體的固定化酶制備方法

在審

• 申請號: 202111153509.6
• 申請日: 2021-09-29
• 公開（公告）號: CN113789320A
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發明（設計）人: 畢艷紅;李明依;王朝宇;張睿;季青霞;趙祥杰;鄧思洋
• 申請（專利權）人: 淮陰工學院
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10;C12N9/20;C12N9/76;C01G49/08;B82Y30/00;B82Y40/00
• 代理公司: 淮安市科文知識產權事務所 32223
• 代理人: 廖娜;李鋒

1.一種以磁性淀粉為載體的固定化酶制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

磁性淀粉納米粒子的制備：向磁性Fe₃O₄納米粒子水溶液中加入可溶性淀粉，于80~110°C下持續攪拌0.5~3.0 h后，冷卻至室溫得沉淀，經多次洗滌沉淀后冷凍干燥得磁性淀粉納米粒子；

磁性淀粉納米粒子固定化酶的制備：向所述磁性淀粉納米粒子中加入磷酸緩沖液A和戊二醛，于室溫下交聯0.5~4.0 h后多次洗滌獲得沉淀，然后加入磷酸緩沖液B及游離酶液，于20~55 °C固定化1.0~10.0 h，期間不停攪拌，固定化結束后將體系冷卻至室溫獲取沉淀，冷凍干燥即得磁性淀粉納米粒子固定化酶。

2.根據權利要求1所述的以磁性淀粉為載體的固定化酶制備方法，其特征在于，所述磁性Fe₃O₄納米粒子與可溶性淀粉的質量比為6:1~2:1。

3. 根據權利要求1所述的以磁性淀粉為載體的固定化酶制備方法，其特征在于，所述磁性淀粉納米粒子與磷酸緩沖液A的料液比為1:10~1:30 g/mL。

4. 根據權利要求1所述的以磁性淀粉為載體的固定化酶制備方法，其特征在于，所述游離酶液與磷酸緩沖液B的料液比為1:20~1:50 g/mL。

5.根據權利要求1所述的以磁性淀粉為載體的固定化酶制備方法，其特征在于，所述磁性Fe₃O₄納米粒子的制備方法如下：

向裝有去離子水的容器中通氮氣20~60 min，按摩爾比1:2~1:0.5分別加入Fe²⁺及Fe³⁺，在溫度為40~100 °C下不停攪拌直至溶解，向容器中滴加已通氮氣20~60 min的NaOH溶液，并不停攪拌，當pH到達9~12時停止滴加，繼續通氮氣攪拌一段時間，待體系穩定后使反應體系冷卻至室溫，多次洗滌后獲得沉淀，對其進行冷凍干燥即得所述磁性Fe₃O₄納米粒子。

6. 根據權利要求5所述的以磁性淀粉為載體的固定化酶制備方法，其特征在于，所述NaOH溶液的摩爾濃度為1.0~3.0 mol/L。

7. 根據權利要求5所述的以磁性淀粉為載體的固定化酶制備方法，其特征在于，所述Fe²⁺來源于FeSO₄·7H₂O，所述Fe³⁺來源于FeCl₃·6H₂O。

8. 根據權利要求1至7中任一項所述的以磁性淀粉為載體的固定化酶制備方法，其特征在于，所述游離酶液中的酶為胰蛋白酶Trypsin，TRY或脂肪酶，所述脂肪酶為疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶Thermomyces lanuginosus lipase，TLL。

9.根據權利要求1至7中任一項所述的以磁性淀粉為載體的固定化酶制備方法，其特征在于，所述磷酸緩沖液A和磷酸緩沖液B的pH均為6.0~9.0；

所述戊二醛的濃度為0.5~4.0% v/v。

10.根據權利要求1至7中任一項所述的以磁性淀粉為載體的固定化酶制備方法，其特征在于，在磁性淀粉納米粒子的制備過程中，所述多次洗滌沉淀的洗滌方式為用去離子水清洗；

在磁性淀粉納米粒子固定化酶的制備過程中，所述多次洗滌沉淀的洗滌方式為用去離子水和相應pH的磷酸緩沖液交替清洗。