[發明專利]硫素介導促進植物小花南芥超量吸收累積鉛的調控方法

在審

• 申請號: 202111150751.8
• 申請日: 2021-09-29
• 公開（公告）號: CN113899650A
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 王吉秀;李博;秦麗;祖艷群;湛方棟;李明銳;何永美;蔣明
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: G01N5/04
• 分類號: G01N5/04;G01N21/31;G01N21/73;B09C1/10;A01G22/00;A01G7/06
• 代理公司: 昆明金科智誠知識產權代理事務所(普通合伙) 53216
• 代理人: 楊釗霞

1.硫素介導促進植物小花南芥超量吸收累積鉛的調控方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1，土壤選擇：

取廢棄礦渣堆附近農田土，均為0-20cm耕層種植玉米的土壤，風干后過2mm篩，裝塑料盆待用；

S2，植株種植：

利用小花南芥種子進行基質土育苗至苗期，挑選生長狀況相近的幼苗，分別移栽至盆中，用1/2Hoagland營養液每2天澆灌一次；

S3，硫素溶液配制：

配制3種不同硫形態：即硫磺S⁰、硫化鈉Na₂S、硫酸鈉Na₂SO₄，硫磺S⁰、硫化鈉Na₂S、硫酸鈉Na₂SO₄的處理濃度分別為0mg·.kg^-1、75mg·kg^-1、150mg·kg^-1；

S4，硫素處理：

將S3中配制的3中溶液對小花南芥植株進行噴灑處理；

S5，生物量測定

澆水至土壤呈半濕潤狀態，拔取整株小花南芥，先用自來水快速沖洗掉其根部附著的雜質，再用去離子水沖洗3次，用濾紙吸干植株表面水珠，均勻分成兩份；一份把地下部和地上部分開裝進牛皮紙信封，放置105℃烘箱中殺青30min，然后于75℃烘至恒重，分別稱量地下部和地上部干重；另一份鮮樣保存待測亞細胞中的硫和鉛含量；

S6，亞細胞中硫和鉛測定

將制備的小花南芥鮮樣地下部和地上部分開，準確稱取1.000g鮮樣于研缽中，加入預冷的亞細胞提取液10mL，快速在研缽中冰浴研磨至勻漿狀，然后轉移至50mL離心管中，1000r·min-1低速離心10min，移除上清液，沉淀即為細胞壁組分；

然后將移除的上清液至于高速冷凍離心機中，4℃下12000r·min-1離心45min，上清液即為細胞可溶組分，沉淀即為細胞器組分；每組分均加入硝酸-高氯酸混酸，采用可調電熱板加熱消煮至澄清，移至50mL容量瓶定容，利用原子吸收分光光度計測定鉛含量，電感耦合等離子體發射光譜儀測定硫含量；

S7，鉛含量測定

采用濃縮HNO3-HClO4和濃縮HNO3-H2O2消化法測定土壤和植物中鉛含量，然后用火焰原子吸收分光光度計進行測定；

S8，數據統計與分析

試驗數據統計各處理間差異顯著性分析采用DPS7.05軟件中Duncan′s新復極差法多重比較，顯著性差異水平為p0.05，所得數據以平均值±標準差表示。

2.根據權利要求1所述的硫素介導促進植物小花南芥超量吸收累積鉛的調控方法，其特征在于，S6中，亞細胞提取液為DTT:1mmol·L^-1、蔗糖：0.25mol·L^-1、Tris-HCl:50mmol·L^-1，pH＝7.4。

3.根據權利要求1所述的硫素介導促進植物小花南芥超量吸收累積鉛的調控方法，其特征在于，S1中，土壤理化性質為：pH值6.25，有效硫10.67mg·.kg^-1，鉛含量2618.74mg·kg^-1，有機質16.87g·.kg^-1，有效磷12.08mg·kg^-1，堿解氮116.34mg·kg^-1，速效鉀28.77mg·.kg^-1，陽離子交換量16.45cmol·kg^-1。

4.根據權利要求1所述的硫素介導促進植物小花南芥超量吸收累積鉛的調控方法，其特征在于，S6中，富集系數和轉運系數采用以下公式計算：

Bioconcentration factor(BCF)＝heavy metal content in shoot ofplant(mg kg-1)/heavy metal content in soil(mg kg-1)；

Translocation factor(TF)＝heavy metal content in shoot ofplant(mg kg-1)/heavy metal content in root ofplant(mg kg-1)。