[發明專利]一種新型冠狀病毒的T細胞免疫檢測方法

有效

• 申請號: 202111150064.6
• 申請日: 2021-09-29
• 公開（公告）號: CN113801208B
• 公開（公告）日: 2023-09-22
• 發明（設計）人: 劉軍;張杰;林浩;武桂珍;高福
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所
• 主分類號: C07K14/165
• 分類號: C07K14/165;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.一種多肽組合物，其特征在于，所述多肽組合物由S1多肽庫、S2多肽庫、M多肽庫、N多肽庫中的任意一個以上的多肽庫組成；

所述S1多肽庫由氨基酸序列如SEQ?ID?NO.87～SEQ?ID?NO.178所示的多肽組成，S2多肽庫由氨基酸序列如SEQ?ID?NO.179～SEQ?ID?NO.271所示的多肽組成，M多肽庫由氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.29所示的多肽組成，N多肽庫由氨基酸序列如SEQ?IDNO.30～SEQ?ID?NO.86所示的多肽組成。

2.根據權利要求1所述的多肽組合物，其特征在于，所述多肽組合物能與MHC-I或MHC-II類分子結合，其中，當多肽組合物與MHC結合時能被CD4⁺或CD8⁺T細胞識別。

3.權利要求1所述的多肽組合物在制備用于評估新冠患者、新冠康復者或新冠疫苗接種者細胞免疫水平的產品中的應用。

4.一種評估新冠患者、新冠康復者或新冠疫苗接種者細胞免疫水平的試劑盒，其特征在于，含有權利要求1或2所述多肽組合物。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還設置有酶聯免疫斑點技術檢測板，檢測板上預包被捕獲T細胞分泌的細胞因子的單克隆抗體。

6.一種評估新冠患者細胞、新冠康復者或新冠疫苗接種者免疫水平的非疾病診斷目的的檢測方法，其特征在于，使用權利要求1或2所述多肽組合物刺激新冠患者的PBMC細胞，細胞在體外擴增之后，然后使用ELISpot檢測多肽刺激后是否出現斑點，即IFN-γ的釋放。

7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述方法的步驟如下：

(1)分離樣品中的外周血單個核細胞；

(2)培養擴增步驟(1)的外周血單個核細胞；

(3)取IFN-γ捕獲抗體進行包被，孵育，加入封閉液封閉；

(4)去除封閉液，加入多肽組合物和步驟(2)的外周血單個核細胞，孵育，洗滌，去除液體；

(5)加入IFN-γ單克隆抗體，孵育，去除上清，洗滌；

(6)加入親和素-HRP結合物，孵育，去除上清，洗滌；

(7)檢測并讀取斑點。

8.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述方法中設置有陰性對照；陽性對照的刺激溶液為佛波酯。

9.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述方法步驟(2)中培養擴增所述的外周血單個核細胞，包括以下步驟：

(1)取外周血單個核細胞，加入培養基和肽庫溶液，孵育；

(2)加入含有白介素7的培養基，孵育；

(3)加入含有白介素2的培養基，孵育；

(4)離心，收集沉淀的細胞，洗滌，靜息，即得擴增的外周血單個核細胞。

10.根據權利要求9所述的檢測方法，其特征在于，所述培養基為含10％胎牛血清的RPMI1640培養基；所述IL-7的濃度含量為15-25ng/mL；所述IL-2的濃度含量為175～225U/mL。