[發明專利]牛血清白蛋白修飾金納米粒及其制備方法和佐劑應用

在審

• 申請號: 202111143997.2
• 申請日: 2021-09-28
• 公開（公告）號: CN115869393A
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 劉穎;王心蓮;陳春英;趙宇亮
• 申請（專利權）人: 廣東粵港澳大灣區國家納米科技創新研究院
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/135;A61P31/14;A61P37/04
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 戴志攀

本發明涉及一種牛血清白蛋白修飾金納米粒及其制備方法和佐劑應用，制備方法包括以下步驟：將氯金酸溶液回流煮沸后，加入檸檬酸鹽溶液繼續煮沸進行還原反應，得到金納米粒；將牛血清白蛋白與所述金納米粒混合并攪拌，固液分離，取固體，得到牛血清白蛋白修飾金納米粒。本發明以牛血清白蛋白為模板對金納米粒進行生物礦化，得到牛血清白蛋白修飾金納米粒，可用作疫苗佐劑。與裸的金納米粒相比，牛血清白蛋白修飾的金納米粒分散性更好，表現出良好的穩定性，且在長達一個月的時間內沒有明顯的沉淀；細胞實驗表明，該納米佐劑的毒性明顯低于商業油乳佐劑ISA206，體內實驗表明，該納米佐劑并可提高機體對抗原的免疫應答反應。

技術領域

本發明涉及疫苗技術領域，特別是涉及一種牛血清白蛋白修飾金納米粒及其制備方法和佐劑應用。

背景技術

口蹄疫是豬、牛、羊等主要家畜和其它家養、野生偶蹄動物共患的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，易感動物達70多種。臨床特征是在口腔黏膜、蹄部和乳房皮膚發生水皰性疹。該病傳播途徑多、速度快，曾多次在世界范圍內暴發流行，造成巨大政治、經濟損失。口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種具有高度傳染性的疾病，被認為是偶蹄動物最重要的疾病之一。該病發病率高，在亞洲、非洲、中東及南美地區均有流行，為國家畜牧業帶來巨大的經濟損失，被國際獸疫局列為A類傳染病。目前接種疫苗被認為是防控口蹄疫疫情最有效的手段，現有口蹄疫疫苗多為滅活疫苗。

滅活疫苗免疫原性較差，維持的免疫時間短暫，常常需要添加佐劑以提高疫苗效力。目前應用于口蹄疫疫苗的佐劑主要為鋁佐劑或油基佐劑，但這些佐劑存在毒副作用大、穩定性差、對胞內病毒感染的免疫增強作用有限的缺陷，在皮下接種后易引起腫脹或結塊等不良反應，需要開發更高效、低毒的新型佐劑來解決上述問題。

納米顆粒因具有小尺寸、高比表面積、易于修飾等特性在生物醫學領域受到廣泛關注，已有研究證實金納米粒具有免疫增強作用，但由于金納米粒的表面能較高容易團聚且毒性較大易發生溶血作用，從而限制了其在疫苗佐劑中的應用。

發明內容

基于此，有必要提供一種毒副作用較小、免疫增強作用較好的牛血清白蛋白修飾金納米粒。

一種牛血清白蛋白修飾金納米粒的制備方法，包括以下步驟：

將氯金酸溶液回流煮沸后，加入檸檬酸鹽溶液繼續煮沸進行還原反應，得到金納米粒；

將牛血清白蛋白與所述金納米粒混合攪拌，固液分離，取固體，得到牛血清白蛋白修飾金納米粒。

在其中一個實施例中，所述氯金酸溶液的濃度為0.25mM～1mM，所述檸檬酸鹽溶液的濃度為35mM～40mM。

在其中一個實施例中，所述氯金酸溶液中的氯金酸和所述檸檬酸鹽溶液中的檸檬酸鹽的摩爾比為1：(3～16)。

在其中一個實施例中，所述牛血清白蛋白與所述金納米粒的摩爾比為(200～300):1。

在其中一個實施例中，還包括以下步驟：將所述氯金酸溶液的pH值調節至7.5～8.0，將所述檸檬酸鹽溶液的pH值調節至7.5～8.0。

在其中一個實施例中，所述固液分離采用離心的方法，所述攪拌的轉速為100～300rpm，所述攪拌的時間為2～3小時，所述離心的轉速為7500rpm～11000rpm，所述離心的時間為5～10min。

本發明還提供了一種牛血清白蛋白修飾金納米粒，其根據如上所述的制備方法制備得到。

本發明還提供了一種如上所述的牛血清白蛋白修飾金納米粒作為佐劑在制備疫苗產品中的應用。

本發明還提供了一種疫苗產品，其包括抗原和如上所述的牛血清白蛋白修飾金納米粒。

在其中一個實施例中，所述抗原為滅活口蹄疫病毒抗原，所述牛血清白蛋白修飾金納米粒與所述抗原的質量比為1：(2～5)。