[發明專利]含有適合用于缺血性疾病治療的細胞的細胞群體的體外增殖方法

在審

• 申請號: 202111143284.6
• 申請日: 2013-09-30
• 公開（公告）號: CN114164174A
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 淺原孝之;增田治史;田中里佳
• 申請（專利權）人: 公益財團法人神戶醫療產業都市推進機構;學校法人東海大學;干細胞醫療公司;學校法人順天堂
• 主分類號: C12N5/0786
• 分類號: C12N5/0786;C12N5/071;A61K35/28;A61K35/15;A61K35/44;A61K35/51;A61P9/10;A61P3/10;A61P17/02
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 魯煒;彭昶

本發明涉及增殖和/或修飾含有來自無血清培養下的單核細胞級分的血管內皮祖細胞的細胞群體的方法，通過所述方法獲得的細胞群體，用于缺血性疾病的含有所述細胞群體的治療劑的生產方法等。在本發明中，簡化了制備用于缺血性疾病的治療的細胞群體的方法，并且提供了在那樣的治療中更有效的細胞群體。提供了方法，其特征在于在含有干細胞因子、白介素?6、FMS?樣酪氨酸激酶3配體、血小板生成素和血管內皮細胞生長因子的無血清培養基中培養來自骨髓、臍帶血或外周血的單核細胞，從而增殖內皮祖細胞。還提供了通過所述方法獲得的細胞群體。

本申請是2013年9月30日提交的題為“含有適合用于缺血性疾病治療的細胞的細胞群體的體外增殖方法”的PCT/JP2013/076618號發明專利申請的分案申請，原申請進入中國國家階段獲得的國家申請號為201380062214.5。

技術領域

本發明涉及增殖和/或修飾含有來自無血清培養下的單核細胞級分的血管內皮祖細胞（vascular endothelial progenitor cell）的細胞群體的方法（所述細胞適合用于缺血性疾病的治療），通過所述方法獲得的細胞群體，用于缺血性疾病的含有所述細胞群體的治療劑的生產方法，等。

背景領域

針對缺血性心臟病，在近年已經應用了骨髓單核細胞移植治療和通過收集外周血干細胞使用內皮祖細胞（EPC）的細胞移植治療。因此，已經特別地期望用于培養大量EPC的技術的出現。通過本發明人開發的來自CD34和/或CD133陽性細胞的血管內皮祖細胞的體外增殖方法已經使得提供EPC的有效培養技術成為可能（專利文件1）。由本發明人發明的分析血管內皮細胞的分化中的動力學的方法已經闡明了內皮細胞樣大型集落（分化的EPC集落）形成細胞和內皮細胞樣小型集落（未分化的EPC集落）形成細胞的存在，其已經使得能夠預測和理解細胞移植的治療效果（專利文件2）。此外，本發明人已經展示了從骨髓單核細胞有效增殖CD34和/或CD133陽性細胞的方法（專利文件3）。

在另一個方面，已經報道了EPC的血管再生能力通過EPC和稱為血管生成T細胞并存在于CD34陰性細胞群體中的CD3 陽性-CD31陽性細胞的共培養而提高，并且暗示了所述CD34陰性細胞群體含有提高EPC能力的細胞（非專利文件1）。

[文件列表]

[專利文件]

專利文件 1: WO 2006/090882

專利文件 2: WO 2006/090886

專利文件 3: WO 2006/093172

[非專利文件]

非專利文件 1: Circulation 2007, 116: 1671-1682。

發明概述

通過本發明解決的問題

如上文提及的文件中顯示的，本發明人發展了新的EPC培養技術，但是其中的EPC制備步驟仍需要時間和成本因為CD34和/或CD133陽性細胞需要從外周血等分選。此外，如在上文提及的非專利文件1中，能夠提高EPC的能力的細胞可以存在于CD34陰性細胞群體中。因此，如在上文提及的專利文件3中，研究了在沒有分選CD34和/或CD133陽性細胞以獲得EPC級分的情況下，或通過在給定比例混合CD34陽性細胞和CD34陰性細胞的情況下用于培養單核細胞的條件。結果，其證實了，認為具有分化至血管內皮細胞的高潛力的分化的（大類型）EPC集落形成細胞通過本發明的方法有效增殖，并且令人驚訝地，在血管發生作用以及組織可修復性中，通過所述方法獲得的培養或細胞群體優于通過培養CD34和/或CD133陽性細胞獲得的培養或細胞群體，因為它們具有炎癥抑制作用連同優異的血管內皮形成性，并且對缺血性疾病的治療有效。