[發(fā)明專利]一種固定化酶法制備橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111122757.4 | 申請日： | 2021-09-24 |
| 公開（公告）號： | CN113881659A | 公開（公告）日： | 2022-01-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 朱思明;王春慶 | 申請（專利權(quán)）人： | 華南理工大學(xué) |
| 主分類號： | C12N11/089 | 分類號： | C12N11/089;C12N9/24;C12P19/44;C12P19/14 |
| 代理公司： | 廣州市華學(xué)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245 | 代理人： | 蘇運(yùn)貞 |
| 地址： | 510640 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 固定 法制 橙皮 素二氫查耳酮 葡萄 糖苷 方法 | ||
1.一種固定化酶法制備橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷的方法，其特征在于：包括如下步驟：
S1、取橙皮苷、氫氧化鈉、催化劑溶解于水中，反復(fù)抽真空后通入N2，反復(fù)抽真空后通入H2，反應(yīng)至反應(yīng)釜中H2壓力不再變化，終止反應(yīng)；調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至2.5～3.5，氫化完成得到橙皮苷二氫查耳酮；
S2、將磁性金屬-有機(jī)骨架、鼠李糖苷酶、交聯(lián)劑混合，反應(yīng)，得到固定化鼠李糖苷酶；
S3、取步驟S1所得橙皮苷二氫查耳酮和步驟S2所得固定化鼠李糖苷酶，加入到pH為1～7的PBS緩沖液中，反應(yīng)，得到橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶法制備橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷的方法，其特征在于：
步驟S2中所述的磁性金屬-有機(jī)骨架通過如下方法制備得到：取金屬-有機(jī)骨架分散于水中，加入FeCl3·6H2O和FeSO4·7H2O，反應(yīng)；調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至8～12，繼續(xù)反應(yīng)；用永磁鐵收集沉淀，洗滌，干燥，即得到磁性金屬-有機(jī)骨架。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的固定化酶法制備橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷的方法，其特征在于：
所述的金屬-有機(jī)骨架、FeCl3·6H2O、FeSO4·7H2O的配比為50～100g:100～400g:150～200g。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的固定化酶法制備橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷的方法，其特征在于：
磁性金屬-有機(jī)骨架制備過程中所述的反應(yīng)的條件為攪拌狀態(tài)下65～85℃反應(yīng)30～35min；所述的繼續(xù)反應(yīng)的條件為攪拌狀態(tài)下60～65℃反應(yīng)24～30h；
所述的調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH所用的試劑為濃度20％～30％的氨水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶法制備橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷的方法，其特征在于：
步驟S1中所述的催化劑為雷尼鎳或鈀碳；
步驟S2中所述的金屬-有機(jī)骨架為MIL-101(Cr)、MIL-100(Cr)、ZIF-96和UIO-66中的任意一種；
步驟S2中所述的交聯(lián)劑為EDC/NHS，其中EDC和NHS的摩爾比為2～3:1～4。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的固定化酶法制備橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷的方法，其特征在于：
步驟S1中所述的橙皮苷、氫氧化鈉、催化劑、水的配比為10～50g:15～30g:5～25g:100～500mL；
步驟S2中所述的磁性金屬-有機(jī)骨架、鼠李糖苷酶、交聯(lián)劑、PBS緩沖液的配比為50～100g:0.2～1g:200～400mL:100～200mL；
步驟S3中所述的橙皮苷二氫查耳酮和固定化鼠李糖苷酶的配比為5～20g:2～15g。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的固定化酶法制備橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷的方法，其特征在于：
步驟S1中所述的反應(yīng)的時(shí)間為1～6h；
步驟S2中所述的反應(yīng)的條件為5～10min；
步驟S3中所述的反應(yīng)的條件為溫度為20～70℃，時(shí)間為10～40min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶法制備橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷的方法，其特征在于：
步驟S1中所述的調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH所用的試劑為濃度35％～40％的鹽酸，調(diào)節(jié)反應(yīng)液pH至3。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶法制備橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷的方法，其特征在于：
步驟S3中所述的PBS緩沖液的pH為3～7。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶法制備橙皮素二氫查耳酮葡萄糖苷的方法，其特征在于：
步驟S1中所述的抽真空后通入N2和抽真空后通入H2的重復(fù)次數(shù)為2～3次。
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