[發明專利]一種在豬上誘導高效表達外源基因的方法在審
| 申請號： | 202111116983.1 | 申請日： | 2021-09-23 |
| 公開（公告）號： | CN113817773A | 公開（公告）日： | 2021-12-21 |
| 發明（設計）人： | 賴良學;王可品;金琴 | 申請（專利權）人： | 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院;生物島實驗室;三亞豬種質資源創新研究院 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N5/10;C12N15/65 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 邊人洲 |
| 地址： | 510530 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 誘導 高效 表達 基因 方法 | ||
1.一種在豬上誘導高效表達外源基因的方法，其特征在于，所述方法包括在豬基因組內的開放性位點Rosa26和安全性位點Hipp11進行基因修飾；
所述基因修飾包括將rtTA表達盒敲入Rosa26位點，將TRE3G啟動的報告基因表達盒敲入Hipp11位點。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述報告基因表達盒中的報告基因兩側具有被phiC31重組酶特異性識別的attP位點。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述rtTA表達盒敲入Rosa26位點的第一個內含子。
4.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，所述rtTA表達盒具有新霉素抗性；
優選地，所述rtTA表達盒的核酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。
5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，所述報告基因表達盒具有嘌呤霉素抗性；
優選地，所述報告基因表達盒的核酸序列包括SEQ ID NO.2所示的序列。
6.根據權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，所述方法還包括將所述報告基因表達盒中的報告基因替換為目的基因的步驟。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，將所述報告基因表達盒中的報告基因替換為目的基因的步驟包括：
利用phiC31重組酶介導的位點特異性重組反應以及基因盒式置換方法將所述報告基因表達盒中的報告基因替換為目的基因。
8.根據權利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述目的基因包括KRASG12D和/或CTLA4Ig-T2A-PDL1。
9.根據權利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于，所述報告基因表達盒中的報告基因包括tdTomato；
優選地，所述tdTomato的核酸序列包括SEQ ID NO.3所示的序列。
10.根據權利要求1-9任一項所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
將具有新霉素抗性的rtTA表達盒敲入豬基因組內的Rosa26位點的第一個內含子，將具有嘌呤霉素抗性的TRE3G啟動的報告基因表達盒敲入豬基因組內的Hipp11位點。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院;生物島實驗室;三亞豬種質資源創新研究院，未經中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院;生物島實驗室;三亞豬種質資源創新研究院許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202111116983.1/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
