[發明專利]一種發酵生產白喉毒素CRM197蛋白的菌種培養基、配制方法以及菌種復蘇培養方法

在審

• 申請號: 202111114577.1
• 申請日: 2021-09-23
• 公開（公告）號: CN113755380A
• 公開（公告）日: 2021-12-07
• 發明（設計）人: 馬偉;朱楠
• 申請（專利權）人: 艾美衛信生物藥業（浙江）有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/02;C12R1/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種發酵生產白喉毒素CRM197蛋白的菌種培養基，其特征在于，由包括體積比為（1000）：（2-6）：（1-5）：（24-42）的溶液A、溶液B、溶液C和溶液D制成；

每1000mL所述溶液A由包括以下原料制成：酵母提取物 20-32g、酪蛋白氨基酸 7-13g、L-色氨酸 47-58mg、磷酸二氫鉀3-8g、氯化鈣1-2g；

每100mL所述溶液B由包括以下原料制成：七水硫酸鎂 20-24g、β-丙氨酸110-130mg、煙酸107-120mg、庚二酸6.5-10.5mg、五水硫酸銅0.3-1g、五水硫酸鋅0.1-0.6g、四水硫酸錳55-90mg、鹽酸 2-4mL；

每100mL所述溶液C由包括以下原料制成：L-胱氨酸 15-23g、鹽酸 11-24ml；

每100mL所述溶液D由包括以下原料制成：麥芽糖30-55g、氯化鈣0.5-2g。

2.根據權利要求1所述的發酵生產白喉毒素CRM197蛋白的菌種培養基，其特征在于，由包括體積比為（1000）：（2）：（1）：（30）的溶液A、溶液B、溶液C和溶液D制成。

3.根據權利要求1所述的發酵生產白喉毒素CRM197蛋白的菌種培養基，其特征在于，每1000mL所述溶液A由包括以下原料制成：酵母提取物 20g、酪蛋白氨基酸 10g、L-色氨酸50mg、磷酸二氫鉀 5g、氯化鈣 1g；

每100mL所述溶液B由包括以下原料制成：七水硫酸鎂 22.5g、β-丙氨酸 115mg、煙酸115mg、庚二酸 7.5mg、五水硫酸銅 0.5g、五水硫酸鋅0.2g、四水硫酸錳75 mg、鹽酸 3mL；

每100mL所述溶液C由包括以下原料制成：L-胱氨酸 20g、鹽酸 20ml；

每100mL所述溶液D由包括以下原料制成：麥芽糖50g、氯化鈣0.5g。

4.根據權利要求1所述的發酵生產白喉毒素CRM197蛋白的菌種培養基，其特征在于，所述溶液A、溶液B、溶液C、溶液D均采用50℃-60℃的注射用水加以配制。

5.一種根據權利要求1-4中任意一項所述的發酵生產白喉毒素CRM197蛋白的菌種培養基的配制方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、配制溶液

S1.1、配制溶液A

將酵母提取物、酪蛋白氨基酸、L-色氨酸、磷酸二氫鉀、氯化鈣用注射用水進行充分混合溶解，再定容至1000ml，得到溶液A；

S1.2、配制溶液B

將七水硫酸鎂、β-丙氨酸、煙酸、庚二酸、五水硫酸銅、五水硫酸鋅、四水硫酸錳、鹽酸用注射用水進行充分混合溶解，再定容至100ml，得到溶液B；

S1.3、配制溶液C

將L-胱氨酸 、鹽酸用水進行充分混合溶解，再定容至100ml，得到溶液C；

S1.4、配制溶液D

將麥芽糖、氯化鈣用注射用水進行充分混合溶解，再定容至100ml，得到溶液D；

S2、溶液混合

按比例在溶液A中加入溶液B和溶液C，滅菌；冷卻后，加入溶液D，然后加入瓊脂粉，滅菌分裝即可得到菌種培養基。

6.根據權利要求5所述的一種發酵生產白喉毒素CRM197蛋白的菌種培養基的配制方法，其特征在于，S1.1、配制溶液A中，將酵母提取物、酪蛋白氨基酸、L-色氨酸、磷酸二氫鉀、氯化鈣用注射用水進行充分混合溶解，調節pH至7.4±0.2，再定容至1000ml，得到溶液A。

7.根據權利要求6所述的一種發酵生產白喉毒素CRM197蛋白的菌種培養基的配制方法，其特征在于，S1.1、配制溶液A，將酵母提取物、酪蛋白氨基酸、L-色氨酸、磷酸二氫鉀、氯化鈣用注射用水進行充分混合溶解，調節pH至7.4±0.2，再定容至1000ml，采用0.45um濾膜進行澄清過濾，得到溶液A。