[發明專利]檢測急性B淋巴細胞白血病微小殘留的抗體組合物及方法

在審

• 申請號: 202111113241.3
• 申請日: 2021-09-18
• 公開（公告）號: CN113933511A
• 公開（公告）日: 2022-01-14
• 發明（設計）人: 潘建華;張靜文;蘭山卉;鄭倩;李明敏
• 申請（專利權）人: 廣州金域醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;C07K16/28
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香;顧書玲

本發明公開了一種檢測急性B淋巴細胞白血病微小殘留的抗體組合物及方法，所述抗體組合物包括抗CD19抗體、抗CD10抗體、抗CD34抗體和抗CD22抗體。本發明可以實現僅需一管完成17個指標的檢測，樣本量需求少，骨架抗體不需要重復使用，試劑成本低，設計的17個檢測指標涵蓋各種異常細胞的表達模式，提升了白血病微小殘留細胞的檢出率，不僅可用于治療后微小殘留病灶的檢測，還可用于初診患者腫瘤性標記的篩選。

技術領域

本發明屬于生物醫學檢測技術領域，更具體地說，本發明涉及一種檢測急性B淋巴細胞白血病微小殘留的抗體組合物、試劑盒及檢測方法。

背景技術

急性淋巴細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是早期分化階段淋巴細胞惡性克隆性增殖性疾病，同時它也是一組高度異質性疾病，其中，急性B淋巴細胞白血病(B-ALL)發病率約占急性淋巴細胞白血病的85％，以骨髓與外周血中原始和幼稚髓性細胞異常增生為主要特征，臨床表現為貧血、出血、感染和發熱、臟器浸潤、代謝異常等，多數病例病情急重，預后兇險，如不及時治療常可危及生命。

目前，通過聯合化療，白血病完全緩解率大大提高，但白血病復發是當前白血病治療的主要問題，復發的根源主要來自體內殘留的白血病細胞。通常，將這種白血病經治療緩解后體內仍殘留少量白血病細胞的狀態定義為微小殘留病(minimal residual disease，MRD)。

臨床上需要根據MRD水平的高低，調整治療方案，調節用藥量，以達到治愈的目的。因此，能否準確測定MRD具有重要的臨床價值。目前可用于急性淋巴細胞白血病微小殘留檢測的有細胞形態學、染色體核型分析、分子生物學相關基因檢測、多參數流式細胞分析等幾種方法。

細胞形態學分析其靈敏度較低，且治療后殘留的腫瘤細胞可能較少，形態學有一定的局限；染色體核型分析實驗周期較長；分子生物學方法雖然靈敏度較高，但對于核型正常的病例，則無法使用。基于白血病相關免疫表型的多參數流式細胞術(FCM)檢測微小殘留，具有快速簡便的特點，是目前公認的檢測微小殘留的有效方法。

使用多參數流式細胞術檢測殘存白血病細胞采用的分析方法主要為監測白血病相關免疫表型(LAIP)或“不同于正常的表達模式”(DFN)，LAIP方法需要在初診免疫分型時進行指標的篩選，否則容易漏診，而DFN方法對分析人員的經驗和專業知識水平要求較高。進行多參數流式細胞分析可使用傳統流式細胞儀進行檢測，但受到檢測通道影響，目前較多使用的是6～10色的檢測方案，每個樣本需要進行多個不同的檢測，不僅骨架抗體需要重復檢測，且所需要的樣本量較多，靈敏度不高。

使用多參數流式細胞術檢測殘存白血病細胞的關鍵點是要鑒別正常分化前體細胞與異常白血病細胞，僅利用單一的一種白細胞分化抗原作為檢測微小殘留病的特異性的免疫標志較為困難，因此，目前多采用在急性淋巴細胞白血病細胞及正常骨髓細胞差異表達的抗原的組合，進行細胞的分型分類。

現有研究中MRD檢測一般使用胞膜泛B細胞標志CD19輔以SSC或者CD45(CD19/SSC或者CD45/CD19雙參數)來設門找到目的B細胞，但對于CD19-CAR-T細胞輸注治療后的患者，治療后部分正常或異常的B細胞表面CD19抗原已呈現表達丟失或減弱，發生免疫逃逸，因此可能產生因為CD19表達減弱或者丟失而造成的漏診。目前仍缺乏具有高度敏感性和特異性的免疫標志物進行微小殘留水平的高效準確的檢測。

根據以上所述，臨床上需要一種靈敏度高、準確性高、檢出率高、簡便快速的檢測技術，以及時監測急性B淋巴細胞白血病的微小殘留病灶。

發明內容

基于此，本發明的目的之一是提供一種檢測急性B淋巴細胞白血病微小殘留的抗體組合物，該抗體組合物設計的檢測指標涵蓋急性B淋巴細胞白血病各種異常細胞的表達模式，可以克服容易漏診的缺陷。

實現上述發明目的的具體技術方案如下：