[發明專利]一種基因突變引物及其設計方法和設計突變質粒的方法在審
| 申請號： | 202111111511.7 | 申請日： | 2021-09-23 |
| 公開（公告）號： | CN113817719A | 公開（公告）日： | 2021-12-21 |
| 發明（設計）人： | 閆亞平;郝文斌;劉龍月;李科 | 申請（專利權）人： | 陜西脈元生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12N15/63;C12N15/64;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 蘇士瑩 |
| 地址： | 710311 陜西省西安市高新區草堂科技產業基地秦*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基因突變 引物 及其 設計 方法 突變 質粒 | ||
1.一種基因突變引物的設計方法，其特征在于，包括以下步驟：下游引物依據突變的序列上游設計。
2.根據權利要求1所述設計方法，其特征在于，所述基因突變包括點突變、缺失、插入或替換。
3.根據權利要求1所述設計方法，其特征在于，所述下游引物的3’末端不超過上游引物的5’末端，整個下游引物包含在互補區之內。
4.根據權利要求1所述設計方法，其特征在于，所述下游引物的3’末端超過上游的5’末端，但不包含基因突變的序列。
5.利用權利要求1～4任一項所述設計方法設計得到的基因突變引物。
6.權利要求5所述基因突變引物在設計突變質粒中的應用。
7.一種獲得突變質粒的方法，其特征在于，包括以下步驟：根據權利要求1～4任一項所述設計方法，基于目標序列設計基因突變引物；
以包含目標序列的質粒為模板，利用基因突變引物進行PCR擴增；
將擴增產物轉化至感受態細胞，培養后挑取單克隆，得突變基因，利用突變基因轉化宿主，得突變質粒；所述感受態細胞能夠體內降解甲基化質粒模板。
8.根據權利要求7所述方法，其特征在于，所述PCR擴增的程序包括：95℃預變性5min；95℃變性20s，(Tm-5)℃退火20s，72℃延伸時間為質粒大小/DNA聚合酶合成速度，變性到延伸25～35個循環；72℃再延伸5～10min。
9.根據權利要求7所述方法，其特征在于，得擴增產物后，還包括去除原模板質粒。
10.利用權利要求5所述基因突變引物或權利要求7～9任一項所述方法獲得的突變質粒。
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