[發明專利]柯薩奇病毒A16型毒株及其應用

有效

• 申請號: 202111109653.X
• 申請日: 2021-09-23
• 公開（公告）號: CN113564132B
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 張改梅;劉建凱;梁祁;潘紅星;張黎;趙麗麗;謝學超;陳磊;馬廷濤;顧美榮
• 申請（專利權）人: 北京民海生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C07K14/085;C07K16/10;A61K39/125;A61P31/14
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 孫怡

本發明涉及生物技術領域，具體公開了柯薩奇病毒A16型毒株及其應用。本發明的柯薩奇病毒A16型毒株，其P1結構蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。該毒株型內和型間交叉性良好、遺傳穩定，可作為柯薩奇病毒A16型血清中和抗體效價檢測用毒株，為柯薩奇病毒A16型相關單/多價疫苗研發提供支持。該毒株免疫原性好、滴度高、毒力強，為建立穩定的感染動物模型提供攻擊毒株，對于構建CV?A16小鼠模型至關重要。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及柯薩奇病毒A16型毒株及其應用。

背景技術

手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）是由腸道病毒引起的傳染病，腸道病毒包括20多種類型，其中柯薩奇病毒A16型（Coxsackievirus type A16，CA16）和腸道病毒71型（enterovirus71，EV71）是引起世界各地手足口病的兩種常見重要病原體，兩者交替流行或同時在一個地區流行傳播。而已上市的EV-A71疫苗對CV-A16無交叉保護作用。中和抗體檢測是開展CV-A16流行病學調查和疫苗免疫原性評價的關鍵指標之一。中和抗體效價檢測的準確性與使用的檢測毒株密切相關。建立符合疾病流行特征的基因型標準檢測毒株，固定檢測用毒株代次，提高疫苗中和抗體檢測的準確性、重復性，可保障疫苗臨床前和臨床試驗的免疫原性評價具有重要意義。目前，國內外尚未有柯薩奇病毒A16型標準檢測毒株。亟需企業自行篩選并建立標準檢測毒株。

另外，任慶杰等（任慶杰, 李敏, 楊曉嵐, 等. Cox A16 型手足口病乳鼠動物模型的建立及免疫、病理特征[J].中國獸醫學報, 2013, 33( 11) : 1685-1690．）通過1日齡C57BL/6J乳母鼠馴化得到穩定的致死11日齡小鼠適應株CA16-TS，CA16-TS株可致小鼠后肢麻痹和嚴重的肌肉壞死，隨后體質量逐漸降低至死亡，CA16-TS沒有表現出強的神經嗜性，而是表現出更強的肌肉侵入性和毒性。MAO 等（Mao Q, Wang Y, Gao R, Shao J, Yao X,Lang S, Wang C, Mao P, Liang Z, Wang J. A neonatal mouse model ofcoxsackievirus A16 for vaccine evaluation. J Virol. 2012 Nov;86(22):11967-76.doi: 10.1128/JVI.00902-12. Epub 2012 Sep 5. PMID: 22951825; PMCID:PMC3486452.）將CV-A16臨床分離株BJCA08 /CA16通過腦內注射方式感染1日齡ICR乳鼠制備手足口病模型，被感染鼠出現身體消瘦，下肢癱瘓，甚至全身肌肉麻痹、死亡，經病理學及免疫組化檢查后發現，該臨床株對肌肉組織有較強的趨向性，極易導致骨骼肌和心肌嚴重壞死。CoxA16所致的小鼠手足口病模型，動物行為上均表現出明顯的共濟失調、肢體癱瘓、精神萎靡等癥狀，這與目前的小鼠適應株一致。李景良（李景良.重組柯薩奇 A16 病毒致病機理及候選疫苗對動物模型致死性保護機制[D].長春:吉林大學, 2014．）將CA16 CC024病毒通過顱腔注射的方式對1日齡的小鼠進行感染，結果攻毒的乳鼠在第3天出現4級臨床癥狀，4級乳鼠的臨床癥狀為肢體麻痹，被感染乳鼠后肢肌肉、脊柱肌肉纖維斷裂，肺組織損傷和充血。免疫組織化學分析結果表明在肌肉組織和肺部有大量的病毒抗原，對肺部組織有明顯的特異趨向性。李雅靜（李雅靜.一種柯薩奇病毒A16型鼠適應株及其應用:中國,201310471154.4 [P].2015-05-13.）用4~6日齡BalB/c乳鼠制備CV-A16鼠適應株，獲得成功。

但目前國內外尚未有柯薩奇病毒A16型相關檢測標準毒株和用于疫苗保護性評價用攻擊毒株。

發明內容

本發明的目的是提供一株交叉中和能力好、遺傳穩定、毒力強的柯薩奇病毒A16型毒株及其應用。

為了實現本發明的目的，本發明的技術方案如下：

首先，本發明提供一種柯薩奇病毒A16型毒株，其P1結構蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.1所示。