[發(fā)明專利]新型冠狀病毒S蛋白全蛋白組篩選的特異性T細(xì)胞表位肽P38及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111107836.8
• 申請(qǐng)日: 2021-09-22
• 公開（公告）號(hào): CN113735946A
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王曉輝;楊崢嶸;馮鐵建;鄒璇;何建凡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市疾病預(yù)防控制中心（深圳市衛(wèi)生檢驗(yàn)中心;深圳市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究所）
• 主分類號(hào): C07K14/165
• 分類號(hào): C07K14/165;C12N15/50;G01N33/569;A61K39/215;A61P31/14
• 代理公司: 北京同恒源知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 廖曦

本發(fā)明提供一種新型冠狀病毒S蛋白全蛋白組篩選的特異性T細(xì)胞表位肽P38及其應(yīng)用，其氨基酸序列如SEQ No.P38所示。本發(fā)明篩選出的T細(xì)胞表位肽經(jīng)過了特異性驗(yàn)證，排除了健康人群中的交叉反應(yīng)，可以作為檢測(cè)新冠患者的特異性抗原。本發(fā)明將篩選出的特異性T細(xì)胞表位肽P38在更多的新型冠狀病毒肺炎恢復(fù)期患者外周血單個(gè)核細(xì)胞樣本中檢測(cè)，獲得其在CD4⁺T和CD8⁺T細(xì)胞中的陽(yáng)性反應(yīng)率分別為48.0％和24.0％。本發(fā)明還提供了能識(shí)別該表位肽的HLA等位基因型別。該表位肽有潛力作為新冠疫苗抗原成分之一，并可用于開發(fā)檢測(cè)試劑盒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及新型冠狀病毒刺突(spike,S)蛋白全蛋白組篩選的 特異性T細(xì)胞表位肽P38及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

在抗病毒免疫中，中和抗體可以阻止病毒入侵，與此同時(shí)，T細(xì)胞免疫應(yīng)答 在清除病毒中的作用也同樣不可忽視。CD4⁺T細(xì)胞有助于誘導(dǎo)記憶性B細(xì)胞成 熟和抗體反應(yīng)；CD8⁺T細(xì)胞協(xié)助病毒的清除，并且記憶性CD8⁺T細(xì)胞可以提供 長(zhǎng)期保護(hù)作用，有效預(yù)防繼發(fā)性感染。嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(severe acute respiratory syndrome corona virus,SARS-CoV)與SARS-CoV-2同屬于β冠狀病毒 屬，兩者所致疾病的臨床癥狀、疾病轉(zhuǎn)歸，以及病毒本身的傳播規(guī)律都具有一定 的相似性。對(duì)SARS康復(fù)患者免疫狀態(tài)的長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，康復(fù)者體內(nèi)的中和抗體 和IgG在兩年內(nèi)持續(xù)存在，2-3年后抗體逐漸消失，6年后檢測(cè)不到記憶性B細(xì) 胞反應(yīng)，但特異性T細(xì)胞應(yīng)答甚至在17年后還能被檢測(cè)到。這些結(jié)果表明相比 抗體，T細(xì)胞免疫記憶更加持久，在抵抗冠狀病毒感染中可能發(fā)揮著更加持久的 作用。因此，在新冠病毒疫苗設(shè)計(jì)及保護(hù)效果評(píng)價(jià)中，除了中和抗體，還應(yīng)關(guān)注 疫苗誘導(dǎo)的特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答。

在COVID-19恢復(fù)期患者體內(nèi)，除了能夠檢測(cè)到病毒特異性抗體，也檢測(cè)到了強(qiáng)烈的T 細(xì)胞應(yīng)答。T細(xì)胞表面的受體分子通過識(shí)別被降解為短肽的T細(xì)胞表位肽從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生 免疫應(yīng)答，另外，已有研究表明，面對(duì)出現(xiàn)的新冠變異株，大多數(shù)T細(xì)胞仍然能夠保持良好 的識(shí)別能力。就長(zhǎng)遠(yuǎn)保護(hù)效果來看，T細(xì)胞免疫發(fā)揮了更加重要的作用。

表位又稱抗原決定簇，它是與T、B細(xì)胞抗原受體及抗體特異性結(jié)合的基本結(jié)構(gòu)單位。 為了開發(fā)具有長(zhǎng)期保護(hù)效果且能保護(hù)變異毒株的疫苗，同時(shí)監(jiān)測(cè)評(píng)估疫苗接種人群的保護(hù)效 果，需要鑒定出人T細(xì)胞能夠識(shí)別的病毒特異性T細(xì)胞表位肽。

目前，關(guān)于SARS-CoV-2 T細(xì)胞表位肽的報(bào)道已有很多，但大多僅基于生物信息學(xué)軟件 預(yù)測(cè)，僅有部分表位肽真正被COVID-19患者T細(xì)胞所驗(yàn)證，并且這些T細(xì)胞表位肽也未經(jīng) 過特異性檢測(cè)。由于在未暴露人群中也檢測(cè)到了由SARS-CoV-2引起的T細(xì)胞應(yīng)答(非特異 性交叉反應(yīng))，這些交叉反應(yīng)可能來源于機(jī)體之前感染的普通冠狀病毒或其他的病原體，它 們的存在給后期免疫評(píng)估帶來了一定程度的干擾。因此，對(duì)篩選出的T細(xì)胞表位肽在未暴露 人群中進(jìn)行交叉反應(yīng)檢測(cè)進(jìn)而確定T細(xì)胞表位肽的特異性是非常有必要的。并且，人體的人 類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)等位基因與個(gè)體的免疫應(yīng)答水平相關(guān)，T細(xì)胞 受體依賴HLA分子識(shí)別不同的抗原肽并激活下游免疫應(yīng)答。人群中HLA分子存在的遺傳多 態(tài)性使人群對(duì)抗原識(shí)別存在巨大的多樣性。因此，對(duì)某T細(xì)胞表位肽需要提供能識(shí)別該表位 肽的HLA等位基因，以預(yù)測(cè)該表位肽能覆蓋的陽(yáng)性應(yīng)答人群范圍，對(duì)表位肽的應(yīng)用提供重要 的人群范圍的參考。