[發(fā)明專利]磷酸化蛋白質(zhì)在膜性腎病中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111107560.3
• 申請(qǐng)日: 2021-09-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113899908A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 戴勇;李珊珊;湯冬娥;何敬全
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳臨研醫(yī)學(xué)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;A61K45/00;A61P13/12
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 劉燚

本發(fā)明公開(kāi)了一種定量檢測(cè)蛋白質(zhì)EZR的T567位點(diǎn)的磷酸化水平的試劑在制備膜性腎病診斷試劑中的應(yīng)用。申請(qǐng)人在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，EZR磷酸化位點(diǎn)T567的磷酸化水平在IMN組中相比于對(duì)照組都存在顯著的下調(diào)，可能是隨著疾病進(jìn)展而逐漸下降的。T567的磷酸化水平下調(diào)可能參與了IMN疾病進(jìn)展過(guò)程中足細(xì)胞的損傷。而切片的免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度及細(xì)胞陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)一步證明，EZRT567位點(diǎn)的磷酸化水平在IMN患者的腎活檢組織中確實(shí)是下降的，因此，可以通過(guò)能夠定量檢測(cè)蛋白質(zhì)EZR的T567位點(diǎn)的磷酸化水平的試劑來(lái)診斷膜性腎病。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請(qǐng)涉及腎病技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及磷酸化蛋白質(zhì)在膜性腎病中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

膜性腎病(membranous nephropathy，MN)是成人腎病綜合征最常見(jiàn)的原因。根據(jù)病因不同，MN可以分為特發(fā)性膜性腎病(idiopathic membranous nephropathy，IMN)和繼發(fā)性膜性腎病(secondary membranous nephropathy，SMN)，其中IMN約占75％，病因不明；SMN病因比較明確，腫瘤、感染、藥物、自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡等可導(dǎo)致SMN。MN患者通常表現(xiàn)為嚴(yán)重蛋白尿、水腫、低蛋白血癥、高脂血癥，診斷依賴腎臟活檢病理，其病理診斷特征包括有：腎小球毛細(xì)血管壁增厚，免疫熒光可見(jiàn)IgG、C3沿著毛細(xì)血管壁沉積，電鏡顯示腎小球臟層上皮細(xì)胞下電子致密物形成；但是IMN需排除繼發(fā)性因素后才能診斷。

目前IMN的病因及發(fā)病機(jī)制并不十分明確，可能和遺傳基因、免疫、環(huán)境因素有關(guān)。雖然在IMN疾病標(biāo)志物及發(fā)病機(jī)制方面有了一定的研究成果，但是對(duì)該疾病關(guān)鍵的觸發(fā)源頭、補(bǔ)體激活機(jī)制及導(dǎo)致足細(xì)胞損傷的具體分子機(jī)制尚未完全明確，這也給IMN的診斷和臨床治療帶來(lái)一定的困難，患者一旦進(jìn)入ESRD階段將會(huì)面臨更為嚴(yán)重的生理心理以及社會(huì)負(fù)擔(dān)。因此尋找新的視角來(lái)進(jìn)一步研究膜性腎病的診斷標(biāo)志物或者潛在的治療干預(yù)靶點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本申請(qǐng)旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題之一。為此，本申請(qǐng)?zhí)岢鲆环N磷酸化蛋白質(zhì)作為膜性腎病的診斷標(biāo)志物，利用能夠定量檢測(cè)該蛋白的特定位點(diǎn)的磷酸化水平的試劑可以有效地診斷膜性腎病或作為潛在的治療干預(yù)靶點(diǎn)。

本申請(qǐng)的第一方面，提供定量檢測(cè)蛋白質(zhì)EZR的T567位點(diǎn)的磷酸化水平的試劑在制備膜性腎病診斷試劑中的應(yīng)用。

根據(jù)本申請(qǐng)實(shí)施例的應(yīng)用，至少具有如下有益效果：

腎小球足細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，胞體具有許多突起，稱為足突。足細(xì)胞對(duì)腎小球?yàn)V過(guò)屏障的選擇通透性十分重要并且足細(xì)胞發(fā)揮功能主要基于細(xì)胞結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)，特別是足突結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)。EZR(ezrin，Gene ID：7430)是肌動(dòng)蛋白-質(zhì)膜連接蛋白，主要存在于足細(xì)胞足突，EZR的磷酸化位點(diǎn)T567的磷酸化在維持細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)，動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)B細(xì)胞受體遷移，8-細(xì)胞胚胎緊密化，凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮重要作用。而申請(qǐng)人在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，EZR磷酸化位點(diǎn)T567的磷酸化水平在IMN組中相比于對(duì)照組存在顯著的下調(diào)，可能是隨著疾病進(jìn)展而逐漸下降的。T567的磷酸化水平下調(diào)可能參與了IMN疾病進(jìn)展過(guò)程中足細(xì)胞的損傷。而切片的免疫組織化學(xué)染色強(qiáng)度及細(xì)胞陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)一步證明，EZR的T567位點(diǎn)的磷酸化水平在IMN患者的腎活檢組織中確實(shí)是下降的，因此，可以通過(guò)能夠定量檢測(cè)蛋白質(zhì)EZR的T567位點(diǎn)的磷酸化水平的試劑來(lái)診斷膜性腎病。

其中，EZR的氨基酸序列如下所示：