[發明專利]一株分泌抗菌核凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用

有效

• 申請號: 202111096426.8
• 申請日: 2021-09-16
• 公開（公告）號: CN113717948B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 匡華;姚靜靜;胥傳來;徐麗廣;孫茂忠;劉麗強;馬偉;吳曉玲;宋珊珊;胡擁明;郝昌龍
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/44;C07K14/765;G01N33/53;G01N33/577
• 代理公司: 無錫承果知識產權代理有限公司 32373
• 代理人: 張婷婷

本發明公開了一株分泌抗菌核凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用，該單克隆抗體雜交瘤細胞株的保藏名為單克隆細胞株SLS?2G5，保藏編號為CGMCC?No.20792。以1?(3，5?二氯苯基)?1H?吡咯?2，5?二酮(Done)與3?巰基丙酸乙酯的加成反應水解產物PD為半抗原，將半抗原與載體蛋白偶聯制備免疫原PD?BSA。對小鼠進行免疫原PD?BSA注射免疫后，再通過PEG方法與骨髓瘤細胞融合，經過間接競爭酶聯免疫法的篩選和五次亞克隆，得到本發明的單克隆抗體雜交瘤細胞株。此細胞株分泌的單克隆抗體可制成菌核凈檢測盒，對菌核凈具有較好親和力和檢測靈敏度，可用于食品中菌核凈殘留量的免疫檢測。

技術領域

本發明屬于食品安全免疫檢測技術領域，具體涉及一株分泌抗菌核凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用。

背景技術

菌核凈(dimethachlone，DMT)屬于二羰基亞胺類廣譜殺菌劑，具有低毒、高效、持效期長等優勢，廣泛應用于防治水稻紋枯病，油菜、向日葵、大豆菌核病和煙草赤星病。農藥使用量的增加不僅增加了人類通過食物鏈接觸農藥的風險，而且對環境和非目標生物產生了毒性影響。人體可以通過攝入食物、水果和蔬菜、吸收皮膚化學物質和吸入灰塵顆粒暴露于菌核凈殺菌劑。因此，建立快速有效的檢測菌核凈含量的方法具有重要意義及市場價值。

目前的檢測方法包括儀器分析法和免疫分析法。儀器分析法如高效液相色譜法([1]東保柱，王振，景嵐，周洪友.HPLC法同時檢測土壤中多菌靈、菌核凈、速克靈、咪鮮胺4種殺菌劑[J].農藥，2016，55(03)：205-207.)、氣相色譜串聯質譜法([2]劉建平，駱洪，連海飛，崔艷，聶晶.QuEChERS法萃取-氣相色譜-三重四級桿串聯質譜法檢測大蔥等鱗莖類蔬菜中6種殺菌劑的分析方法[J].分析儀器，2020(06)：40-45.)檢測范圍在0.04～10.0μg?mL^-1。由于對樣品前處理繁瑣，干擾物較多及儀器工作條件的限制，同時對操作人員的技術要求較高，因此儀器方法并不適用于現場檢測。

免疫分析方法相對于儀器檢測方法，具有低成本、高通量、高靈敏、對技術人員要求低等特點，因此適用于大量樣品的快速篩查。因此免疫檢方法對菌核凈的檢測具有重要意義。劉蓉蓉于2009年至2012年先后報道了針對菌核凈的多克隆抗體制備([3]劉媛，劉賢金，張存政，劉蓉蓉.菌核凈的多克隆抗體及其制備和應用[P].江蘇：CN101691404A，2010-04-07.)，及時間分辨熒光免疫檢測([4]劉媛，劉蓉蓉，劉賢金，方敦煌，宋春滿，HuovinenTuomas，Vehni?inen?Markus，L?vgren?Timo.時間分辨熒光免疫分析方法檢測煙草中菌核凈殘留[J].分析化學，2012，40(07)：1114-1117；[5]劉媛，劉賢金，張霄，王冬蘭.由間接競爭時間分辨熒光免疫分析體系檢測煙草中菌核凈殘留的方法[P].江蘇：CN102590499A，2012-07-18.)，但檢測靈敏度均不高，其中靈敏度最優的為間接競爭時間分辨熒光免疫分析，IC₅₀為32ng?mL^-1。

酶聯免疫法(ELISA)是一種低成本、快速且便攜的免疫學檢測方法，檢測時對樣本的純度要求不高而且操作簡便，適用于大量樣本的現場快速檢測出結果。建立高效的免疫學檢測方法，篩選高特異性的單克隆抗體是其重要前提，因此，開發一種針對菌核凈的高效靈敏的檢測方法是亟待解決的問題。

發明內容

發明目的：為了克服現有技術中存在的不足，本發明提供一株分泌菌核凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用，由該細胞株分泌的抗體針對菌核凈具有較高的檢測靈敏度，可以用來建立針對菌核凈的免疫學檢測方法。

技術方案：為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

本發明的一個目的是，提供一株分泌菌核凈單克隆抗體的雜交瘤細胞株，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏名為單克隆細胞株SLS?2G5，保藏編號為CGMCC?No.20792，地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏日期2020年09月27日。