[發明專利]一種利用解脂耶氏酵母菌轉化檸檬烯生成紫蘇酸的方法

在審

• 申請號: 202111094367.0
• 申請日: 2021-09-17
• 公開（公告）號: CN113801899A
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 楊道茂;高書英;楊開越
• 申請（專利權）人: 廈門茂升教育科技有限公司
• 主分類號: C12P7/40
• 分類號: C12P7/40;C12N1/16;C07C51/48;A61K31/19;A61P35/00;C12R1/645
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

本發明涉及紫蘇酸生產方法領域，具體公開了解脂耶氏酵母菌利用檸檬烯生成紫蘇酸的方法，通過將解脂耶氏酵母菌接種于改良沙保氏培養基中培養，并加入R?(+)?檸檬烯，然后轉化，離心，萃取后蒸干濃縮，獲得紫蘇酸。本發明的方法簡單，成本低，產量高，獲得的紫蘇酸為單一構型的，是生物合成的屬于天然產物范疇的紫蘇酸，具有較高的價值。

技術領域

本發明涉及紫蘇酸生產方法領域，具體涉及一種利用解脂耶氏酵母菌轉化檸檬烯生成紫蘇酸的方法。

背景技術

紫蘇酸是一種化學物質，分子式是C10H14O2，對于紫蘇酸的生產，現有技術中已經有關于微生物可以將(+)-檸檬烯轉化生成紫蘇酸的相關記載，例如，有研究表明Pseudomonas putida GS1可以將(+)-檸檬烯生成紫蘇酸，Arxula adeninivorans CSIR Y-1149和Yarrowia lipolytica CBS 599T均能生成紫蘇酸。還有Pseudomonas putida DSM12264，采用流化床離子交換色譜柱進行產物原位分離技術進行連續化轉化生產紫蘇酸，但是對于能夠轉化檸檬烯生成紫蘇酸的菌株單一，大部分產量也較低，且生產紫蘇酸的成本相對較高。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供了一種利用解脂耶氏酵母菌轉化檸檬烯生成紫蘇酸的方法，通過解脂耶氏酵母在一定的條件下對于檸檬烯轉化生產紫蘇酸，產量高，成本低，工藝簡單。

本發明提供了一種利用解脂耶氏酵母菌轉化檸檬烯生成紫蘇酸的方法，具體包括如下步驟：

S1，將解脂耶氏酵母菌進行活化和純化；

所述解脂耶氏酵母菌的菌種保藏編號為CICC 1444；

S2，將純化后的解脂耶氏酵母菌事先在50mL沙保氏培養基中在 30℃、200rpm下培養24h(OD₆₀₀＝0.2～0.3)作為種子液，按照接種量3-4％ (vol/vol)接種于發酵培養基中培養46-50h，加入體積分數為0.5-2.0％的R- (+)-檸檬烯，然后轉化46-50h，離心，萃取后蒸干濃縮，獲得紫蘇酸；

所述種子培養基配方為：40g/L葡萄糖、10g/L蛋白胨，水1000 mL，pH4.0-6.0；

所述發酵培養基配方為：40g/L甘蔗糖蜜，10g/L蛋白胨，水 1000ml，pH4.0-6.0。

進一步地，S2中，解脂耶氏酵母菌接種于種子培養基中的培養條件為于 30℃，200rpm。

進一步地，S2中，解脂耶氏酵母菌接種于發酵培養基中的培養溫度為 30℃。

進一步地，S2中，所述R-(+)-檸檬烯事先用等體積無水乙醇溶解。

進一步地，S2中，離心條件為：10,000轉/分，離心時間10分鐘。

進一步地，萃取過程取等量乙酸乙酯對離心獲得的上清液進行萃取。

進一步地，S2中，蒸干濃縮過程具體為：真空度為0.1MPa下，蒸發溫度為40℃。

進一步地，S2中，將純化后的解脂耶氏酵母菌接種于發酵培養基中培養 48h，，轉化時間為48h。

本發明還提供了一種由上述方法制備得到的紫蘇酸。

本發明還提供了一種所述的紫蘇酸在制備抑癌藥物中的用途。

與現有技術相比，本發明的有益效果在于：

1、本發明中利用甘蔗糖蜜代替傳統的葡萄糖制備培養基，有利于降低成本。