[發(fā)明專利]一種靶向人CD47的抗體、制備方法和應用

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• 申請日: 2021-09-17
• 公開（公告）號: CN115819581A
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發(fā)明（設計）人: 趙勇;徐偉;莫世甫
• 申請（專利權(quán)）人: 優(yōu)邁生物科技（連云港）有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K19/00;C12N5/10;C12N15/13;C12N15/62;C12N15/85;G01N33/574;A61K39/395;A61K47/68;A61K45/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 上海一平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;馬莉華

本發(fā)明涉及一種靶向人CD47的抗體、制備方法和應用。具體地，涉及能特異性結(jié)合人CD47蛋白并阻斷其與SIRPα的結(jié)合，從而因此阻斷CD47對表達SIRPα的巨噬細胞的抑制作用的抗人CD47抗體及其抗原結(jié)合片段，本發(fā)明還涉及所述抗體及其抗原結(jié)合片段的制備方法和用途。

技術(shù)領域

本發(fā)明屬于生物免疫技術(shù)領域，具體涉及一種靶向人CD47的抗體、制備方法和應用。

背景技術(shù)

CD47是45～50kD的跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白(Ig)超家族的成員。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞上高表達的CD47與巨噬細胞上的配體SIRPα結(jié)合，使得SIRPα酪氨酸磷酸化，從而發(fā)出抑制性調(diào)節(jié)信號，抑制巨噬細胞的吞噬作用。對應的，阻斷該通路可以解除巨噬細胞對腫瘤細胞吞噬的抑制作用，提高機體對腫瘤細胞的免疫反應，為腫瘤的免疫治療提供一條新途徑。

在以CD47-SIRPα軸為靶標的腫瘤治療中，最主要的機制是巨噬細胞的激活，從而增強巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬作用。其次，阻斷CD47可能進一步將巨噬細胞募集到腫瘤組織中，以及向腫瘤組織募集額外的免疫細胞的細胞因子和趨化因子，如單核細胞趨化蛋白3(MCP-3)，這些細胞因子的分泌有助于CD47阻斷療法的功效。再次，靶向CD47-SIRPα的療法也可能改變腫瘤中巨噬細胞的極化狀態(tài)。巨噬細胞按其表型和功能活性又可以分為M1(Ⅰ型)和M2(Ⅱ型)兩種，M1巨噬細胞能產(chǎn)生大量的促炎細胞因子，并介導抵抗細胞內(nèi)寄生蟲和抑制腫瘤生長；M2巨噬細胞則產(chǎn)生較少的促炎分子，參與組織損傷修復、血管生成和促進腫瘤生長。研究發(fā)現(xiàn)，阻斷CD47-SIRPα后可顯著增加小鼠微環(huán)境中的M1巨噬細胞腫，而小鼠M2巨噬細胞則沒有顯著的增加。最后，其它免疫細胞也可以響應CD47阻斷療法。SIRPα在骨髓免疫細胞上高度表達，因此它可能是骨髓譜系的關鍵調(diào)節(jié)劑。在小鼠中，CD47通過SIRPα+樹突狀細胞來調(diào)節(jié)抗原攝取，使用同源免疫活性腫瘤模型發(fā)現(xiàn)，CD47阻斷的治療效果取決于樹突狀細胞。通過刺激巨噬細胞或樹突細胞的抗原呈遞，靶向CD47-SIRPα軸的療法可以促進腫瘤的適應性免疫應答。

CD47廣泛表達于多種細胞，特別是在新生紅細胞上高表達。因此靶向CD47的治療性抗體有可能會引起貧血。另一方面，體內(nèi)游離抗人CD47抗體的濃度也會由于紅細胞對抗人CD47抗體的吸附作用而大大降低。

因此，開發(fā)新的治療性抗人CD47抗體，使得其與腫瘤細胞表面CD47蛋白的結(jié)合選擇性更強，與紅細胞表面CD47蛋白結(jié)合更弱，成為新型治療性抗人CD47抗體的目標之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種靶向人CD47的抗體、制備方法和應用。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種抗人CD47抗體的重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包括選自下組的三個互補決定區(qū)：

VH-CDR1：DYGMA(SEQ ID NO.1)

VH-CDR2：FIX₁NLASSIYYADTVX₂G(SEQ ID NO.2)

VH-CDR3：AGDYRSFX₃Y(SEQ ID NO.3)；

其中，X₁＝T、R或G；X₂＝T或K；X₃＝P或D；

其中，X₁、X₂和X₃各自獨立地不同時為T、T和P，

上述氨基酸序列中任意一種氨基酸序列還包括任選地經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個氨基酸的，并能夠保留對CD47的結(jié)合親和力的衍生序列。

在另一優(yōu)選例中，所述重鏈可變區(qū)包括選自下組的三個互補決定區(qū)：

(A1)M7