[發明專利]馬來西亞大蝦病毒的檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202111089485.2
• 申請日: 2021-09-16
• 公開（公告）號: CN114369683B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 何建國;繆琪瑾;翁少萍;周丹丹
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12Q1/6848;C12N15/11;C12N15/41;C12R1/93
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 趙崇楊

本發明公開了一種馬來西亞大蝦病毒的檢測試劑盒。本發明以馬來西亞大蝦病毒MrPV?4基因組中第313～1029位的核苷酸序列為靶基因，設計開發了相應的檢測試劑盒，并建立了巢氏和qPCR檢測方法。本發明所建立的巢氏PCR方法的靈敏度高、重復性和特異性好，最低檢出限為10copies/μL；所建立的qPCR方法的Ct值與標準品拷貝數的線性關系良好，最低檢出限為10supgt;2/supgt;copies/μL，可用于養殖過程中鐵殼蝦病的監測，用于MrPV?4的檢測。

技術領域

本發明屬于水產病毒病原的檢測技術領域。更具體地，涉及一種馬來西亞大蝦病毒的檢測試劑盒。

背景技術

水產疾病嚴重制約著水產養殖業的發展，越來越多的跡象表明水產疾病的研究對新病毒的快速檢測及鑒定有著迫切需求。面對俞漸紛繁復雜的水產病毒，宏病毒組學似乎可以滿足鑒定新病毒的需求。宏病毒組學將環境中的病毒通過富集，測序，加以生物信息分析，初步拼接出病毒的基因組序列，并將其初步分類到已知的各病毒科屬。這種方法不需要培養病毒的特定細胞株系，也不需要對病毒進行抗原抗體反應，已有多項研究表明通過宏病毒組學方法得到了傳統方法難以發現的新病毒。本發明通過對感染“鐵殼蝦”病的馬拉西亞大蝦體內的病毒進行富集和宏病毒組測序，發現了一種新的小RNA病毒，暫命名為MrPV-4。

“鐵殼蝦”是指表現出體表發黃，生長緩慢或停止生長，以及雙螯肢變藍，變長等性早熟現象的蝦，鐵殼蝦雖不會死亡，但會導致產量下降，造成飼料等養殖資源的浪費，導致經濟損失。為便于對鐵殼蝦病進行監測，及時對可能存在的風險進行針對性處理，有必要建立一種鐵殼蝦病的監測方法，針對MrPV-4進行檢測，開發相應的檢測試劑盒等。

巢式PCR和熒光定量PCR具有檢測特異性強，靈敏度高等優點，現已廣泛應用于水產動物病毒病原的檢測。例如，高文輝等基于牡蠣皰疹病毒DNA聚合酶基因建立了該病毒的巢式PCR檢測方法(高文輝,白昌明,蔡生力,等.基于牡蠣皰疹病毒DNA聚合酶基因的巢式PCR檢測方法的建立及應用[J].水產學報,2016,40(3):326-333.)。中國專利CN103966358A也公開了一種鱖傳染性脾腎壞死病毒熒光定量PCR檢測試劑盒及檢測方法。但目前還未有針對MrPV-4進行檢測，以監測鐵殼蝦病的試劑盒和方法。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有上述技術中的缺陷和不足，提供一種馬來西亞大蝦病毒的檢測試劑盒。

本發明的第一個目的是提供一種用于檢測馬來西亞大蝦病毒MrPV-4的靶基因。

本發明的第二個目的是提供所述靶基因在制備檢測MrPV-4的產品中的應用。

本發明的第三個目的是提供一種馬來西亞大蝦病毒MrPV-4的檢測試劑盒。

本發明的第四個目的是提供一種用于檢測所述靶基因的引物組。

本發明的第五個目的是提供上述引物組在制備檢測MrPV-4的產品中的應用。

本發明的第六個目的是提供一種檢測MrPV-4的巢氏PCR方法。

本發明的第七個目的是提供一種檢測MrPV-4的熒光定量PCR方法。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

羅氏沼蝦(Macrobrachium?rosenbergii)又名馬來西亞大蝦，本發明通過對感染“鐵殼蝦”病的馬來西亞大蝦體內的病毒進行富集和宏病毒組測序，從中發現了一種新的小RNA病毒，暫將其命名為Macrobrachium?rosenbergii?picorna?virus?4(MrPV-4)，基因組序列如SEQ?ID?NO.1所示。