[發(fā)明專利]利用炔丙基锍鹽修飾蛋白質(zhì)半胱氨酸位點(diǎn)的方法及其應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202111083655.6 | 申請(qǐng)日： | 2021-09-14 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN114133425A | 公開（公告）日： | 2022-03-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李子剛;尹豐;趙融通 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 北京大學(xué)深圳研究生院;深圳灣實(shí)驗(yàn)室坪山生物醫(yī)藥研發(fā)轉(zhuǎn)化中心 |
| 主分類號(hào)： | C07K1/107 | 分類號(hào)： | C07K1/107;A61K38/07;A61K47/68;A61P35/00;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253 | 代理人： | 周瓊 |
| 地址： | 518055 廣東省深*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 利用 丙基 修飾 蛋白質(zhì) 半胱氨酸 方法 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種利用炔丙基锍鹽修飾蛋白質(zhì)半胱氨酸位點(diǎn)的方法，其特征在于：蛋白質(zhì)與炔丙基锍鹽在PBS中混勻，pH值范圍為7-11，在37℃水浴中反應(yīng)10-12小時(shí)，蛋白質(zhì)與炔丙基锍鹽的摩爾比范圍為1：5-1：10；
所述蛋白質(zhì)帶有游離的半胱氨酸或有暴露在蛋白表面的半胱氨酸；
所述炔丙基锍鹽為3-I、3-II或3-III中的一種或幾種，結(jié)構(gòu)式分別如下：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：pH值為7.4，在37℃水浴中反應(yīng)12小時(shí)，蛋白質(zhì)與炔丙基锍鹽的摩爾比范圍為1：10。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述蛋白質(zhì)在蛋白C端連綴了AblN31C結(jié)構(gòu)域。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述蛋白質(zhì)具有PDZ結(jié)構(gòu)域。
5.炔丙基锍鹽在制備探測(cè)生物體內(nèi)半胱氨酸的探針中的用途，其特征在于所述炔丙基锍鹽為3-II，蛋白質(zhì)與炔丙基锍鹽3-II在PBS中混勻，pH值范圍為7-11，在37℃水浴中反應(yīng)10-12小時(shí)，蛋白質(zhì)與炔丙基锍鹽的摩爾比范圍為1：5-1：10，反應(yīng)后利用免疫熒光方法進(jìn)行細(xì)胞膜成像。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于pH值為7.4，在37℃水浴中反應(yīng)12小時(shí)后超濾，再進(jìn)行細(xì)胞染色。
7.炔丙基锍鹽在制備抗體-藥物偶聯(lián)物中的用途，其特征在于所述炔丙基锍鹽為3-III，炔丙基锍鹽3-III與蛋白質(zhì)反應(yīng)，蛋白質(zhì)與炔丙基锍鹽3-III的摩爾比為1：10，在PBS溶液中混勻，pH值為7.4，在37℃水浴中反應(yīng)10小時(shí)，反應(yīng)后通過(guò)分子篩在快速蛋白質(zhì)液相色譜上純化。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于，炔丙基锍鹽3-III的制備步驟如下：選擇一甲基澳瑞他汀E作為細(xì)胞毒藥，先將一甲基澳瑞他汀E的非活性末端進(jìn)行修飾，形成硫醚結(jié)構(gòu)，再將硫醚結(jié)構(gòu)烷基化。
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