[發明專利]MicroRNA-100-5p在預防或治療非創傷性股骨頭壞死中的應用

在審

• 申請號: 202111076426.1
• 申請日: 2021-09-14
• 公開（公告）號: CN113699229A
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 張健;楊武;陶宇章;王宏偉;郭民康;湯博彧
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學附屬第一醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113;C12N15/11;A61K45/00;A61P19/08
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

本發明公開一種MicroRNA?100?5p在預防或治療非創傷性股骨頭壞死中的應用，受重慶醫科大學附屬第一醫院倫理委員會的批準，收集髖關節置換術中的股骨頭。使用液氮研磨法研磨骨組織為粉末，加入無酶PBS制成勻漿，再使用超速離心法以100000g的轉速離心提取外泌體。檢測壞死區外泌體中miR?100?5p的表達情況；檢測miR?100?5p對骨髓間充質干細胞成骨分化的影響；檢測miR?100?5p對人臍靜脈微內皮細胞血管形成的影響。壞死區外泌體中，miR?100?5p表達上調；上調的miR?100?5p抑制骨髓間充質干細胞的成骨分化和人臍靜脈微內皮細胞的血管生成。

技術領域

本發明涉及生物分子學及醫學領域，具體涉及利用與非創傷性股骨頭壞死相關的microRNA作為分子標記物在預防或治療非創傷性股骨頭壞死中的應用。

背景技術

非創傷性股骨頭缺血壞死(NONFH)是一種嚴重影響生活質量的致殘性疾病，主要表現為骨細胞壞死、凋亡，后期發生股骨頭塌陷。在美國，每年新發現1萬～2萬名患者罹患該病；在中國，每年報告10萬至20萬例新病例。迄今為止，非創傷性股骨頭壞死的機制主要包括，骨髓間質充干細胞成骨分化減少和血管內皮細胞血管生成降低。因為NONFH的發病機制尚未完全清楚，所以探討NONFH的內在機制及有效治療具有重要意義。

外泌體是通過內吞-融合-分泌的連續過程形成的直徑為40-150nm的微囊泡。外泌體具有與其來源細胞非常相似的膜，其內包含大量的蛋白質、脂質和非編碼RNAs。人體內幾乎所有的細胞都可以合成與分泌外泌體，這導致外泌體在各種細胞外液中廣泛存在。一旦外泌體進入細胞，它們就可以介導細胞間信號轉導并發揮生物調節作用。外泌體已經被報道可以用于治療NONFH，但迄今為止，沒有人詳細研究壞死區骨組織釋放的外泌體在本病中的作用及詳細的分子機制。因此，研究源自NONFH患者壞死區骨組織釋放的外泌體，將有助于揭示患者自身細胞修復失敗的原因。

MicroRNA(miRNAs)是一類長約22～25個核苷酸的內源性非編碼單鏈RNA分子，可通過堿基互補配對的方式結合靶基因的3’非編碼區(3’TTR)，從而抑制翻譯或降解靶基因。MicroRNA在進化過程中高度保守，在生物體內分布廣泛，并參與許多復雜的生物學過程，如胚胎發育、細胞增殖、細胞凋亡、脂肪代謝、骨形成等。有研究表明：miRNAs通過調控成骨分化相關基因表達在骨形成中起關鍵作用，如miR-216促進人脂肪組織來源的間充質干細胞向成骨分化、miR-494通過調節Runx2的表達抑制成骨細胞分化等。

發明內容

本發明的目的在于提供該非創傷性股骨頭壞死相關miRNAs在預防或治療非創傷性股骨頭壞死相關引起的股骨頭壞死中的應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

一種檢測非創傷性股骨頭缺血壞死外泌體的分子標記物，分子標記物非創傷性股骨頭缺血壞死患者壞死區外泌體中表達上調，所述分子標記物為miR-100-5p，序列如SEQID No.1所示，該分子標記物可用于檢測非創傷性股骨頭缺血壞死中。

本發明miR-100-5p抑制劑可用于治療非創傷性股骨頭缺血壞死藥物，能夠促進骨髓間充質干細胞的成骨分化和血管內皮細胞血管形成。miR-100-5p抑制劑為miR-100-5p的反義寡核苷酸或拮抗劑，miR-100-5p的反義寡核苷酸序列為SEQ ID No.2。

用于檢測非創傷性股骨頭缺血壞死的試劑盒，劑盒包括用于檢測miR-100-5p的表達水平的試劑，試劑包括特異性擴增miR-100-5p的引物或探針，其中，引物包括正向引物序列如SEQ ID No.3所示和反向引物為通用引物(Reverse SangonBiotech B661601)。

本發明的有益技術效果是：本發明公開了非創傷性股骨頭壞死相關的分子標記物，并進一步證實所述分子標記物在非創傷性股骨頭壞死患者外泌體中表達上調。利用這些分子標記物檢非創傷性股骨頭壞死可以為為基因治療、藥物治療等臨床應用提供治療靶點和重要依據。