[發明專利]裂解性大腸桿菌噬菌體制劑及其制備和應用

有效

• 申請號: 202111074413.0
• 申請日: 2021-09-14
• 公開（公告）號: CN113789305B
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發明（設計）人: 湯芳;戴建君;王瑜欣;薛峰;李一昊;曾頏
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K35/76;A61P31/04;A01N63/40;A01P1/00;C12R1/92
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 杜靜;徐冬濤

本發明公開了一種裂解性大腸桿菌噬菌體制劑及其制備和應用，所述制劑包括噬菌體PNJ1902、PSD2001和PSD2002；其中，噬菌體PNJ1902的保藏編號為GDMCC?NO：61890?B1，噬菌體PSD2001的保藏編號為GDMCC?NO：61891?B1，噬菌體PSD2002的保藏編號為GDMCC?NO：61892?B1。噬菌體制劑的宿主菌為大腸桿菌O157：H7(ATCC:43895)，其對大腸桿菌ATCC:43895不同年齡的生物被膜具有有效的清除能力，在小鼠腸道中的應用實例也證實，當其用做于體內抑菌劑時具備良好的效果。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及裂解性大腸桿菌噬菌體制劑及其制備和應用。

背景技術

大腸桿菌O157：H7(ATCC:43895)(購買于Testobio，產品編號TS205491)作為一種人畜共患病原菌，可引起人類出血性結腸炎(HC)，有時并發溶血性尿毒綜合征(HUS)，嚴重者并發腎功能衰竭，死亡率較高。大腸桿菌ATCC:43895在豬、牛糞、豬肉和牛肉中的分離率非常高。其主要通過食物傳播，對公眾健康構成威脅。同時，研究發現，大腸桿菌ATCC:43895自1997年后在世界各地出現耐藥菌株。因此，迫切需要新的抗生素替代品來預防和治療大腸桿菌ATCC:43895疾病。

作為一種有效殺滅細菌的病毒，噬菌體在治療細菌感染相關疾病方面的應用價值得到了重新評估。噬菌體作為一種天然抗菌藥物，其固有毒性低，可自我復制，與宿主高度特異性結合，可與宿主共同進化，可有效治療耐藥菌引起的感染。與抗生素治療大腸桿菌感染的小鼠模型相比，噬菌體療法不僅可以降低體內大腸桿菌的含量，保證小鼠的正常生長，而且不會影響腸道菌群。這為今后治療耐藥菌引起的胃腸道感染提供了新思路。但是，目前來說，細菌對單個噬菌體容易產生抗性使單個噬菌體在應用上受到了很大的限制，即現有單個噬菌體對宿主菌剛開始裂解效果良好，但很快就會有抗性細菌產生，導致單個噬菌體失去對抗性細菌的裂解作用，不能滿足生產需要。

發明內容

本發明目的在于提供裂解性大腸桿菌噬菌體制劑及其制備和應用，噬菌體制劑的宿主菌為大腸桿菌O157：H7(ATCC:43895)，其對大腸桿菌ATCC:43895不同年齡的生物被膜具有有效的清除能力，在小鼠腸道中的應用實例也證實，當其用做于體內抑菌劑時具備良好的效果。

本發明目的之一在于提供一種裂解性大腸桿菌噬菌體制劑，所述制劑包括噬菌體PNJ1902、PSD2001和PSD2002；其中，噬菌體PNJ1902的保藏編號為GDMCC?NO：61890-B1，噬菌體PSD2001的保藏編號為GDMCC?NO：61891-B1，噬菌體PSD2002的保藏編號為GDMCC?NO：61892-B1。

在一些實施例中，本申請所述的噬菌體制劑中噬菌體PNJ1902、噬菌體PSD2001和噬菌體PSD2002的效價比例為(1～3)：(1～3)：(1～3)，優選的，噬菌體PNJ1902、噬菌體PSD2001和噬菌體PSD2002的效價比例為1：1：1。

申請人從江蘇省南京市雞場分離到噬菌體PNJ1902，從山東省菏澤市鴨場中篩選出為噬菌體PSD2001和噬菌體PSD2002，已于2021年8月26日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心(地址：廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓)，所述的PNJ1902的命名為：大腸桿菌O157：H7噬菌體PNJ1902，分類命名為Escherichia?coli?phage，其保藏編號為GDMCC?NO：61890-B1；所述的PSD2001的命名為：大腸桿菌O157：H7噬菌體PSD2001，分類命名為Escherichia?coli?phage，其保藏編號為：GDMCC?NO：61891-B1；所述的PSD2002的命名為：大腸桿菌O157：H7噬菌體PSD2002，分類命名為Escherichia?coli?phage，其保藏編號為：GDMCC?NO：61892-B1。