[發明專利]一種柯樂豬的保種方法

在審

• 申請號: 202111073123.4
• 申請日: 2021-09-14
• 公開（公告）號: CN113789367A
• 公開（公告）日: 2021-12-14
• 發明（設計）人: 張依裕;楊酸;譚元成;王盈童;廖朝美;游敏芳
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12Q1/6837
• 分類號: C12Q1/6837;C12Q1/6888;A01K67/02;G16B20/20;G16B20/00
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 張行超

1.一種柯樂豬的保種方法，其特征在于，以原位保種和異位保種相結合，采用微衛星標記技術分析群體內遺傳多樣性及保種效果的監測，或者利用SNP芯片分析技術對柯樂豬保種群進行各世代間的群體遺傳結構和遺傳多樣性分析，為該品種資源的保護和利用提供分子水平上的科學依據。

2.根據權利要求1所述的柯樂豬的保種方法，其特征在于，所述原位保種包括小群體規模保種和多場聯合保種，其中，

所述小群體規模保種包括以下步驟：

1)確定小群體規模

保種群在100～200頭之間，公豬只有4～6個血統的群體，公母留種比例為1∶5，豬的每世代近交系數增量不超過0.5％～1.0％，留種方式采用各家系等量留種；

2)增加豬小群體內的遺傳多樣性

在同一豬品種內的不同類群間相互雜交或輪回雜交，或者引入部分母豬外血，用外血進行雜交，F1代再與本品種回交或再回交，根據性能決定引入外血的比例；選出優秀的公豬或母豬，再與群內其他豬雜交；

所述多場聯合保種包括：設立多個保種點及擴繁場，建立保種選育核心群、保種擴繁群、生產基地三級良繁體系，對柯樂豬進行商品化選育，提高生產性能，保護柯樂豬種質資源，確保資源不丟失，并對柯樂豬種活體及其遺傳材料進行質量檢測，使柯樂豬達到品種標準。

3.根據權利要求1所述的柯樂豬的保種方法，其特征在于，所述異位保種方法為，對柯樂豬的精液、卵母細胞、體細胞及胚胎的進行冷凍保存，協同超數排卵、胚胎移植繁殖技術，充分發揮優良母豬的繁殖潛力,加快優良種畜的擴繁速度，采用體細胞核移植的方法克隆出大量與供體遺傳信息一致的個體；根據不同組織細胞建立各自細胞系或細胞株進行低溫長期保存，并建立DNA文庫。

4.根據權利要求1所述的柯樂豬的保種方法，其特征在于，所述微衛星標記技術方法為，采用ISAG/FAO聯合推薦的30對微衛星標記對柯樂豬保種群體的遺傳多樣性進行檢測。

5.根據權利要求4所述的柯樂豬的保種方法，其特征在于，所述微衛星標記法具體包括以下步驟：

1)采集柯樂豬的耳組織，提取基因組DNA；

2)合成并擴增30對豬微衛星引物；

3)通過ONE-Dscan軟件分析基因片段大小,采用PopGen32和Excel軟件計算有效等位基因數(Ne)、期望雜合度(He)、觀察雜合度(Ho)和PIC。

6.根據權利要求1所述的柯樂豬的保種方法，其特征在于，所述SNP芯片分析技術對柯樂豬保種群進行各世代間的群體遺傳結構和遺傳多樣性分析的方法包括以下步驟：

1)采集柯樂豬的耳組織，提取基因組DNA；

2)對所述柯樂豬的DNA進行SNP芯片分型，篩除不合格的樣本和SNP位點，只使用常染色體上的位點，得到質控數據；

3)對所述質控數據采用Plink(V1.90)軟件進行分析；其中，分別計算柯樂豬保種群體的最小等位基因頻率、期望雜合度、觀察雜合度、多態信息含量和多態性標記比例，分析可樂豬保種群體的遺傳多樣性；

4)采用Plink(V1.90)軟件分析連續性純合片段(runs of homozygosity,ROH),計算基于ROH的近交系數；采用Plink(V1.90)和Gmatix(V2)軟件分別構建狀態同源(identity bystate,IBS)距離矩陣和G矩陣，并繪制熱圖，分析保種群體的親緣關系；

5)去除所述質控數據中的強連鎖位點，計算柯樂豬個體間的遺傳距離，構建狀態同源矩陣和種公豬的群體進化樹。