[發(fā)明專利]抗草甘膦陸地棉轉(zhuǎn)化體R1-2HD及其鑒定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111072587.3
• 申請(qǐng)日: 2021-09-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113801892A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-12-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬燕斌;吳霞;李換麗;文晉;王新勝;李燕娥;秦欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所
• 主分類號(hào): C12N15/84
• 分類號(hào): C12N15/84;A01H5/00;A01H6/60;C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 北京彭麗芳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11407
• 代理人: 彭麗芳

本發(fā)明涉及棉花品種選育領(lǐng)域，具體涉及一種抗草甘膦陸地棉轉(zhuǎn)化體R1?2HD，該轉(zhuǎn)化體R1?2HD是通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法把耐草甘膦基因G10evo?EPSPS導(dǎo)入山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所自選育R15棉花受體中所得。本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因棉花R1?2HD轉(zhuǎn)化體的抗草甘膦基因在不同代次中遺傳穩(wěn)定、抗草甘膦性能顯著提高，并且R1?2HD轉(zhuǎn)化體的外源G10evo?EPSPS基因具有特異插入位點(diǎn)，同時(shí)，該位點(diǎn)插入的特異性可通過(guò)本申請(qǐng)?zhí)峁┑囊镞M(jìn)行鑒定或者根據(jù)插入位點(diǎn)附近的基因組序列設(shè)計(jì)新的組合引物進(jìn)行鑒定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及棉花品種選育領(lǐng)域，具體涉及一種抗草甘膦陸地棉轉(zhuǎn)化體R1-2HD及其鑒定方法。

背景技術(shù)

棉花是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物，在國(guó)民經(jīng)濟(jì)中占有很重要的地位，棉纖維是一種重要的紡織原料，棉籽油和棉籽蛋白是重要的植物油料和蛋白質(zhì)資源。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展和人民生活水平的提高，環(huán)保意識(shí)的提升，對(duì)純棉紡織品的需求日益增加，生產(chǎn)上也要求有多抗的棉花品種，以減少化學(xué)農(nóng)藥防治所帶來(lái)的環(huán)境污染。

當(dāng)前，抗草甘膦除草劑棉花是我國(guó)目前市場(chǎng)應(yīng)用潛力巨大。它的推廣和應(yīng)用，可以在我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，增加對(duì)世界棉花生產(chǎn)的競(jìng)爭(zhēng)力。該轉(zhuǎn)基因棉花材料的培育對(duì)我國(guó)棉花育種具有極大的推動(dòng)力，還有利于增加棉花生產(chǎn)競(jìng)爭(zhēng)力和降低人工投入等優(yōu)勢(shì)，對(duì)促進(jìn)我國(guó)棉花健康持續(xù)發(fā)展具有潛在的巨大利益。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種抗草甘膦陸地棉轉(zhuǎn)化體R1-2HD及其鑒定方法。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

抗草甘膦陸地棉轉(zhuǎn)化體R1-2HD，該轉(zhuǎn)化體R1-2HD是通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法把耐草甘膦基因G10evo-EPSPS導(dǎo)入山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院棉花研究所自選育R15棉花受體中所得，所述轉(zhuǎn)基因棉花的抗草甘膦特性高于受體R15。

進(jìn)一步地，所述的轉(zhuǎn)化體R1-2HD的外源G10evo-EPSPS基因具有特異插入位點(diǎn)，插入位點(diǎn)位于第A11號(hào)染色體47525299-47525334之間，替換掉第A11號(hào)染色體47525299-47525334之間35bp的堿基序列。A11號(hào)染色體含有外源基因G10evo-EPSPS的DNA分子。

進(jìn)一步地，由于受體R15為陸地棉，該棉花基因組為AADD四倍體，其A11基因組與D11染色體具有較高的相似度，不排除該轉(zhuǎn)化體中外源基因插入位點(diǎn)為D11號(hào)染色體中。

進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了上述一種抗草甘膦陸地棉轉(zhuǎn)化體R1-2HD的鑒定方法，其特征在于：通過(guò)外源G10evo-EPSPS基因具有特異插入位點(diǎn)的鑒定實(shí)現(xiàn)，具體的，通過(guò)以下特異引物實(shí)現(xiàn)：

5’-TAGGGTTTCGCTCATGTGTTGA6C-3’；5’-GTATTGGTTGAACCAATCATTC-3’。

本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因棉花R1-2HD轉(zhuǎn)化體的抗草甘膦基因在不同代次中遺傳穩(wěn)定、抗草甘膦性能顯著提高，并且R1-2HD轉(zhuǎn)化體的外源G10evo-EPSPS基因具有特異插入位點(diǎn)，同時(shí)，該位點(diǎn)插入的特異性可通過(guò)本申請(qǐng)?zhí)峁┑囊镞M(jìn)行鑒定或者根據(jù)插入位點(diǎn)附近的基因組序列設(shè)計(jì)新的組合引物進(jìn)行鑒定。

附圖說(shuō)明

圖1為R1-2HD轉(zhuǎn)化體植株具有極好的抗草甘膦除草劑特性；

圖中：受體R15噴施草甘膦后7天后逐漸枯萎死亡；而R1-2HD能夠正常生長(zhǎng)，且在不同生育期抗性穩(wěn)定。

圖2為陸地棉轉(zhuǎn)化體R1-2HD的T4、T5代植株中目標(biāo)基因G10evo-EPSPS的特征片段檢測(cè)。

圖3為R1-2HD轉(zhuǎn)化體中G10evo-EPSPS基因的Southern-blot檢測(cè)。

圖4為PCR擴(kuò)增的R1-2HD轉(zhuǎn)化體中特異條帶。

具體實(shí)施方式