[發(fā)明專利]一種甘蔗莖尖培養(yǎng)的改良方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111066860.1
• 申請日: 2021-09-13
• 公開（公告）號: CN113598058A
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉麗敏;何為中;劉俊仙;劉紅堅;盧曼曼;張榮華;李松;黃杏
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11562
• 代理人: 李瑞雨

本發(fā)明公開了一種甘蔗莖尖培養(yǎng)的改良方法，屬于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。所述改良方法包括以下步驟：選取甘蔗尾梢的莖尖為外植體，在40?45℃無菌水熱激處理，之后接種改良MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至長出新的側(cè)芽；其中，培養(yǎng)期間，自接種第5天開始每天進(jìn)行冷刺激1?3次，持續(xù)10?18天；所述改良MS培養(yǎng)基包括以下組分：MS+0.05?0.15mg/L噻苯隆+0.1?0.25mg/L6?BA+蔗糖20?30g/L。本發(fā)明公開的培養(yǎng)甘蔗莖尖的改良方法，實現(xiàn)莖尖成活率最高達(dá)86.35％，縮短培養(yǎng)周期，滿足市場對于大量甘蔗無性繁殖材料的需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種甘蔗莖尖培養(yǎng)的改良方法。

背景技術(shù)

甘蔗是禾本科甘蔗屬植物，原產(chǎn)于熱帶、亞熱帶地區(qū)。甘蔗中含有豐富的糖分、水分，還含有對人體新陳代謝非常有益的各種維生素、脂肪、蛋白質(zhì)、有機酸、鈣、鐵等物質(zhì)，主要用于制糖，每年市場需求量都比較大。而甘蔗屬無性系繁殖作物，利用自身的蔗莖作為種源繁殖，連續(xù)種植多年后容易感染或者積累病菌，這也嚴(yán)重制約了甘蔗組培苗的周年規(guī)?；a(chǎn)。另外，目前通過熱處理結(jié)合莖尖分生組織培養(yǎng)是現(xiàn)在生產(chǎn)上培養(yǎng)甘蔗脫毒健康種苗的一個主要的技術(shù)。研究結(jié)果表明，該技術(shù)確實可以去除如蔗株上的花葉病、宿根矮化病等，并且很多國家也已經(jīng)利用此技術(shù)建立工廠化生產(chǎn)脫毒苗。但是，此技術(shù)雖然已應(yīng)用較廣泛，但是仍然存在酚污染嚴(yán)重、成活率低等問題，這嚴(yán)重影響了甘蔗脫毒苗的市場供應(yīng)量和供應(yīng)速度。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種甘蔗莖尖培養(yǎng)的改良方法，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，可以明顯減少酚污染，提高甘蔗莖尖培養(yǎng)成活率。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

本發(fā)明提供一種甘蔗莖尖培養(yǎng)的改良方法，包括以下步驟：

選取甘蔗尾梢的莖尖為外植體，在40-45℃熱激處理之后，接種于改良MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至長出新的側(cè)芽；

其中，培養(yǎng)期間，自接種第5天開始每天進(jìn)行冷刺激1-3次，持續(xù)10-18天；所述改良MS培養(yǎng)基包括以下組分：MS+0.05-0.15mg/L噻苯隆+0.1-0.25mg/L 6-BA+蔗糖20-30g/L。

優(yōu)選的是，熱激處理之前，先剝?nèi)ノ采彝鈱尤~鞘，露出生長點，并切取生長點下2-3mm的葉原基，然后用75％酒精浸泡25-30s，再用清水沖洗3-5次。

優(yōu)選的是，所述甘蔗莖尖在40-45℃無菌水中熱激2-3min。

優(yōu)選的是，培養(yǎng)期間冷刺激的方式具體為：自接種第5天開始每天冷刺激3次，之后每間隔5天每天冷刺激次數(shù)減少1次，直至減少到每天冷刺激1次，并持續(xù)5天。

優(yōu)選的是，每天冷刺激的時間為：每天的5點和/或9點和/或21點；

冷刺激溫度為0-4℃，每次冷刺激持續(xù)20-30s。

優(yōu)選的是，還包括培養(yǎng)所述甘蔗莖尖的專用培養(yǎng)裝置；

其中，所述專用培養(yǎng)裝置包括：培養(yǎng)瓶和懸置于所述培養(yǎng)瓶的莖尖承載裝置；

所述培養(yǎng)瓶為具有開口的瓶體；

所述莖尖承載裝置包括第一承載部、第二承載部以及鉤體，所述第一承載部和所述第二承載部均為一端開口的網(wǎng)狀筒體結(jié)構(gòu)，所述第一承載部的開口外側(cè)設(shè)置外螺紋，所述第二承載部的開口內(nèi)側(cè)設(shè)置內(nèi)螺紋，所述第一承載部和所述第二承載部通過所述內(nèi)螺紋和所述外螺紋可拆卸連接；所述第一承接部未開口端與所述鉤體的一端固定連接，所述鉤體的另一端懸掛在所述培養(yǎng)瓶的開口處。

優(yōu)選的是，利用所述專用培養(yǎng)裝置培養(yǎng)所述甘蔗莖尖的方法包括以下步驟：