[發明專利]一種人巨細胞病毒重組抗原的純化方法在審
| 申請號： | 202111065329.2 | 申請日： | 2021-09-12 |
| 公開（公告）號： | CN113788880A | 公開（公告）日： | 2021-12-14 |
| 發明（設計）人： | 李永剛;李偉;張婉君;張杰 | 申請（專利權）人： | 南京珀爾泰生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/045 | 分類號： | C07K14/045;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/14 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 210000 江蘇省南京市棲霞*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 巨細 病毒 重組 抗原 純化 方法 | ||
1.一種人巨細胞病毒重組抗原的純化方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟（1）、將含有重組表達的人巨細胞病毒重組抗原菌體沉淀放入平衡緩沖液中攪拌，菌體重懸均勻后進行超聲破碎，超聲破碎后的破碎液經離心后，收集上清液；
步驟（2）、將步驟（1）中得到的上清液進行濾器過濾處理；
步驟（3）、將步驟（2）中過濾處理后的上清液上樣到親和層析柱，經過洗滌步驟去除雜蛋白，再采用解離液洗脫得到含有目的蛋白的洗脫峰；
步驟（4）、將步驟（3）中得到的洗脫緩沖液透析于保存緩沖液中，進行后續的分析鑒定。
2.根據權利要求1所述的人巨細胞病毒重組抗原的純化方法，其特征在于，所述步驟（1）中，超聲破碎功率200W，超聲破碎99次，每次超聲破碎時間4s，相鄰兩次超聲破碎間隔8s；離心轉速為15000 rpm，離心時間為30 min，離心在4℃下進行。
3.根據權利要求1所述的人巨細胞病毒重組抗原的純化方法，其特征在于，所述步驟（2）中，使用濾器過濾的過濾孔徑為0.45μm。
4.根據權利要求1所述的人巨細胞病毒重組抗原的純化方法，其特征在于，所述步驟（3）中，所述親和層析柱為GST標簽蛋白純化柱，洗脫液為50 mM Tris+10 mM GSH，pH 8.0。
5.根據權利要求1所述的人巨細胞病毒重組抗原的純化方法，其特征在于，所述步驟（4）中，透析采用的透析袋截留分子量8 kD-14 kD，緩沖液為10 mM PBS+20%甘油，pH7.4。
6.根據權利要求1所述的人巨細胞病毒重組抗原的純化方法，其特征在于，所述步驟（1）中，含有重組表達的人巨細胞病毒重組抗原菌體沉淀的制備方法，包括以下步驟：
步驟（11）、將含有GST-pp150目的基因的表達載體轉化到大腸桿菌中，放大培養含有基因的大腸桿菌，利用IPTG誘導蛋白表達，菌液離心后，收集菌體沉淀。
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