[發明專利]miRNA作為生物標記物在制備骨肉瘤檢測制劑中的應用

在審

• 申請號: 202111061976.6
• 申請日: 2021-09-10
• 公開（公告）號: CN113736885A
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 陳天睿;王陽;王迪;周旺;曹昊;李博;謝江濤;王祥敏;黃健;劉貞;陳平;張辛寧;嚴佳杰;王波
• 申請（專利權）人: 上海金域醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香;顧書玲

本發明公開了miRNA在制備骨肉瘤檢測制劑中的應用，所述miRNA為hsa?miR?34a、hsa?miR?1270、hsa?miR?154、hsa?miR?329中的一條或幾條。本發明發現hsa?miR?34a，hsa?miR?1270，hsa?miR?154，hsa?miR?329在骨肉瘤患者的唾液外泌體中顯著上調，且與骨肉癌組織具有較高的一致性，說明這四條miRNA中的一條或幾條可以作為骨肉瘤標志物，應用于制備骨肉瘤檢測制劑中。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，更具體地，本發明涉及多條miRNA作為生物標記物在制備非疾病診斷方法的骨肉瘤檢測制劑中的應用。

背景技術

骨肉瘤是兒童及成人中最常見的惡性骨腫瘤，在原發性骨腫瘤中，骨肉瘤的發病率僅次于漿細胞骨髓瘤，居第2位，好發于10-25歲青年，男女患者比例約為1.5:1。骨肉瘤的惡性程度很高，生長非常迅速，轉移早，侵襲性強，在臨床上作出診斷時已有80％左右的患者發生了肺部或其他部位的轉移。既往骨肉瘤患者的預后極差，5年生存率僅有20％左右，盡管近年來外科手術和化療方面取得了長足的進展，但骨肉瘤患者的5年生存率至今仍徘徊在65％左右，多數患者最終仍然死于骨肉瘤的局部復發或遠處轉移。

由于骨肉瘤具有惡性程度高、生長迅速、侵襲力強、轉移早等腫瘤學特征，所以絕大多數患者就診時已經是癌癥晚期，而研究表明早期診斷及治療可使骨肉瘤患者的生存率及預后效果提高4-5倍。因此，針對骨肉瘤的早期診斷，早期篩查，將骨肉瘤患者的治療窗口提前，改善患者的預后，及時評價放化療的效果，針對骨肉瘤患者的個性化醫療及用藥，尤為重要。

目前骨肉瘤的篩查或者診斷依賴于影像學和組織病理學檢測，影像學由于自身技術特點只能檢測到生長到一定程度的腫瘤，而病理學需要采用外科手術穿刺活檢方法從患者身體獲取腫瘤組織，不但操作技術難度大，成本高，效率低而且依從性較差，無法大批量進行篩查，而且受到醫生技術水平及患者身體狀況等諸多因素影響，不能用于早期篩查和臨床診斷。

miRNA是具有在轉錄后水平調控基因表達功能的非編碼小分子RNA，長度約18-24nt，參與細胞分裂增殖、分化與發育，以及代謝等許多重要的生物過程，在生物種屬之間具有高度的保守性、時序性以及組織特異性。它位于基因內含子中，成熟的miRNA進入RNA誘導的基因沉默復合物(RISC)中，形成非對稱性復合物。RISC中成熟的miRNA鏈可與其靶向mRNA3’非翻譯區特異性結合，從而降解靶mRNA，阻斷蛋白合成，調控基因的表達。

miRNA作為一種在某些腫瘤中異常表達的非編碼的小RNA，參與許多腫瘤的發生發展的相關基因的調控，在這一過程中發揮著十分關鍵的作用，且其即使在大量核酶存在的情況下依舊十分穩定，在各種體液中表達豐富，可以作為腫瘤診斷和預后判斷的生物標志物。在未來臨床治療中，miRNA不僅可以成為新的疾病早期診斷和疾病進程相關的標記物，而且也有望通過改變miRNA的表達或者其靶基因的表達治療疾病。尋找和鑒定與疾病發生相關的miRNA及其靶基因為miRNA的臨床治療提供基礎。

基于以上原因，發現具有高靈敏度及特異性的檢測骨肉瘤的生物標志物miRNA，并建立無創早期篩查方法及評價放化療治療效果的檢測方法是目前研究的熱點也是當務之急。而液態活檢技術(Liquid Biopsy)正好可以解決目前這一痛點，可以很好的解決上述問題。目前主要是針對血液中的DNA片段、血液中循環腫瘤細胞、以及微小RNA通過高通量測序檢測基因突變。

然而，血液樣本盡管包含了全身狀況的眾多信息，但通過提取血液中的miRNA來進行液體活檢，仍有一些固有的缺陷：第一，血液采集具有侵襲性，引起患者不適；第二，這種直接檢測血液中裸露DNA或miRNA也會造成不同程度的損失和降解；第三，血液中成分復雜，來源多樣，信息斑駁，在檢測分析的過程中可能會引起非特異性及受到流體動力學作用的干擾；第四，血液有易凝結的特點，需要采取抗凝處理才能進行下一步的檢驗，而抗凝處理本身有可能會對檢驗結果造成一定的影響；第五，血液中的大量細胞具有數秒至數周或一個月以上的半衰期，也可能對分析結果產生影響。