[發明專利]檢測H5N8亞型禽流感病毒及其PB2-E627K突變的引物和探針及檢測方法

在審

• 申請號: 202111060774.X
• 申請日: 2021-09-10
• 公開（公告）號: CN113637803A
• 公開（公告）日: 2021-11-12
• 發明（設計）人: 趙宗正;劉麗娜;郭振東;張春茂;夏咸柱;高玉偉
• 申請（專利權）人: 軍事科學院軍事醫學研究院軍事獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 崔友明;官群

本發明涉及一種檢測H5N8亞型禽流感病毒及其PB2?E627K突變的引物和探針及檢測方法。所述引物和探針包括H5N8禽流感病毒HA基因檢測引物和探針、H5N8禽流感病毒NA基因檢測引物和探針，以及H5N8禽流感病毒PB2基因E627K突變檢測引物和探針。使用本發明提供的特異性引物和探針，可以判斷H5N8禽流感病毒PB2基因627位基因是否發生E?K突變，對H5N8禽流感病毒致病性和傳播風險進行預判，對于H5N8禽流感病毒防控具有重要意義。

技術領域

本發明屬于包含酶、核酸或微生物的測定或檢驗方法技術領域，具體涉及一種檢測H5N8亞型禽流感病毒及其PB2-E627K突變的引物和探針、試劑盒及檢測方法。

背景技術

H5亞型禽流感病毒嚴重威脅著家禽養殖業和人類健康。2021年之前H5N8禽流感病毒只在野鳥和家禽中流行和傳播，2021年2月俄羅斯向世界衛生組織報告世界首例人感染H5N8禽流感病例，H5N8禽流感病毒對人類健康威脅進一步加大。

禽流感病毒的致病性和跨種傳播與病毒的重組和變異密切相關，研究表明禽流感病毒PB2基因E627K突變可以影響病毒的致病性和跨種傳播，PB2-E627K突變被認為是禽流感病毒的致病性增強和跨種傳播的分子標記。因此檢測H5N8禽流感病毒PB2-E627K突變，對于評估H5N8禽流感病毒致病性和跨種傳播風險具有重大意義，但目前尚未有相關檢測試劑報道。

本發明提供的引物和探針能夠對H5N8禽流感病毒及其PB2-E627K突變進行檢測。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術中存在的上述不足，提供一種檢測H5N8亞型禽流感病毒及其PB2-E627K突變的引物和探針、試劑盒及檢測方法。

第一方面，本發明提供一種檢測H5N8禽流感病毒及其PB2-E627K突變的特異性引物和探針，所述特異性引物和探針包括：

H5N8禽流感病毒HA基因(he5aggluti5i5，血凝素基因)檢測引物和探針：

HA基因正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1：5’-cgaattcatcagagtgccgg-3’

HA基因反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2：5’-tccctggtatggacaagctg-3’

HA基因熒光探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3：5’-FAM-tccctggtatggacaagctg-BHQ1-3’

H5N8禽流感病毒NA基因(Neura5i5idase，神經氨酸酶基因)檢測引物和探針：

NA基因正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4：5’-tccctggtatggacaagctg-3’

NA基因反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5:5’-aacccgaaaccttttacgcc-3’

NA基因熒光探針，其核苷酸序列如SEQ ID NO.6:5’-ROX-aacccgaaaccttttacgcc-BHQ2-3’

H5N8禽流感病毒PB2基因E627K突變檢測引物和探針：

PB2-627E正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.7：5’-atttgcagcagccccatcag-3’

PB2-627K正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.8：5’-atttgcagcagcccccctga-3’

PB2基因反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9:5’-agactccactcctgctgttc-3’