[發明專利]一種蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽及其應用

有效

• 申請號: 202111058845.2
• 申請日: 2021-09-10
• 公開（公告）號: CN113502279B
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發明（設計）人: 王維劍;石峰;咸瑞卿;杭寶建;鞏麗萍;王聰聰;張迅杰;姜樹銀
• 申請（專利權）人: 山東省食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12Q1/34;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308
• 代理人: 李斌

本發明涉及化學分析定量檢測技術領域，尤其涉及一種蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽及其應用。所述特征多肽的氨基酸序列為WDDYTYSWK，該特征多肽能夠用來檢測待測樣品中蝮蛇蛇毒磷脂酶A2的含量，檢測方法為：取氨基酸序列為WDDYTYSWK的蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽，制成系列濃度對照品溶液；取待測樣品，酶解，取酶解后的上清液作為供試品溶液；分別注入液相色譜?質譜儀，選擇雙電荷632.4→624.0作為定量離子對對待測樣品中的蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽的含量進行檢測，可以大大提高蝮蛇蛇毒藥物的質量控制水平，對蝮蛇蛇毒、中間體及其藥物制劑的質量控制均有很好地指導作用。

技術領域

本發明涉及化學分析定量檢測技術領域，尤其涉及一種蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽及其應用。

背景技術

蛇毒是由蛇的毒腺分泌的一種復雜混合物，含有多種蛋白質、多肽、核苷、酶類、金屬離子和其它小分子物質。以蛇毒為原料，分離純化具有獨特藥理活性的單一成分是新藥研發的熱點。目前，已從烏蘇里蝮蛇（Gloydius ussuriensis)、短尾蝮蛇（Gloydius brevicaudus）、哈里氏蝮蛇(Gloydius halys)、日本蝮蛇（Gloydius blomhoffii）等蝮蛇的蛇毒中分離出了類凝血酶、降纖酶、神經生長因子、精氨酸脂酶、L-氨基酸氧化酶和磷脂酶A2等成分。

蛇毒磷脂酶A2 (snake venom PLA2s，svPLA2s)是一類脂解酶的超家族，主要催化甘油磷脂sn-2位點的酯鍵水解，生成脂肪酸(花生四酸酯)和溶血磷脂。svPLA2s具有廣泛毒性效應，包括肌毒性、心毒性、神經毒性、腎、肝毒性和全身出血等損傷，還可誘導炎癥介質、血管舒張和血管收縮介質的釋放，如前列腺素、組胺、血小板活化因子、兒茶酚胺、多巴胺、一氧化氮和內皮素。

目前以蛇毒為原料開發上市的藥物多達十幾種，其中以白眉蝮蛇（烏蘇里蝮蛇亞種）的蛇毒為原料的上市藥物就有注射用白眉蛇毒血凝酶、纖溶酶注射液、降纖酶注射液等多個品種，在這些藥物中磷脂酶A2作為雜蛋白，會導致神經毒性等多種不良反應，必須嚴格控制其含量。因此，在這些藥物的生產過程中監測蛇毒、工藝中間體及終產品的蛇毒磷脂酶A2的含量，對于優選原料、優化工藝、提高產品安全性有重要意義。但目前報道的蛇毒磷脂酶A2檢測方法主要為凝膠電泳法和效價測定法，測定方法繁瑣且準確性差，無法準確表征蛇毒及其提取物的質量。因此建立一種方便快捷，定量準確的蛇毒磷脂酶A2檢測方法，以表征蛇毒及其提取物的質量具有廣泛的社會效益和經濟效應。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的發明目的是提供一種蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽。

本發明的另一發明目是提供上述蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽的應用，所述特征多肽可以大大提高蝮蛇蛇毒藥物的質量控制水平，對蝮蛇蛇毒、中間體及其藥物制劑的質量控制均有很好地指導作用。

為實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案：

一種蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽，氨基酸序列為WDDYTYSWK。

優選地，所述蝮蛇為烏蘇里蝮蛇（Gloydius ussuriensis)、短尾蝮蛇（Gloydius brevicaudus）、哈里氏蝮蛇(Gloydius halys)、日本蝮蛇（Gloydius blomhoffii）。

一種上述蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽在控制蝮蛇蛇毒、中間體或藥物制劑質量方面的應用。

進一步地，上述應用采用以下步驟：