[發明專利]一種高表達AFGF的方法有效

申請號：	202111056851.4	申請日：	2021-09-09
公開（公告）號：	CN113755430B	公開（公告）日：	2023-08-18
發明（設計）人：	袁春梅;姜粉軍;常二鳳;周慧;楊銘斌;劉楊;姜寧健;王培申	申請（專利權）人：	北京益華生物科技有限公司
主分類號：	C12N5/077	分類號：	C12N5/077;C07K14/50
代理公司：	北京紐樂康知識產權代理事務所(普通合伙) 11210	代理人：	田磊
地址：	100041 北京市石***	國省代碼：	北京;11
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種表達 afgf 方法
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【說明書】：

本發明公開了一種高表達AFGF的方法，該方法為：細胞生長到密度為95％時進行傳代；吸出培養液，加入生理鹽水并晃動，棄生理鹽水；加入胰酶消化，使細胞全部懸浮，加入培養基終止消化；吸取細胞懸液放入離心管離心，棄上清，加入生理鹽水，吸取一滴細胞計數，離心棄生理鹽水，用培養基懸細胞加入含培養基的培養瓶中；加入胞壁酰二肽進行誘導；傳代結束的培養瓶放入低溫低氧的培養箱中進行培養。本發明的高表達AFGF的方法利用低溫低氧環境使得骨髓細胞高表達AFGF，從而獲得更多的AFGF；該方法具有高效、簡單、穩定性好的優點。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體來說，涉及一種高表達AFGF的方法。

背景技術

酸性成纖維生長因子(AFGF)是一種多功能強力細胞因子，對促進成纖維細胞的代謝和膠原蛋白的形成發揮著重要功能。AFGF能促進皮膚組織的生長繁殖，它通過與細胞表面特異受體結合，調控皮膚上皮、內皮和基質細胞的分裂、繁殖和生長分化，促進細胞代謝，增強氧化作用；能促進與皮膚損傷有關細胞的迅速生長繁殖，并調節細胞間基質的合成、分泌及分解；能促進角質層細胞的再生，加速皮膚角質層和基質層的修復，促進人體皮膚細胞的生長；能增強皮膚細胞的蛋白質的合成和細胞代謝，具有延緩皮膚細胞衰老、促進表皮細胞的修復和生長作用，使皮膚光滑豐潤。

專利CN102344930A公開了一種酸性成纖維細胞生長因子(aFGF)的簡便化工業技術，通過體外PCR擴增的方法，從人來源的hepG2的eDNA中擴增得到aFGF基因，并通過NdeI和EcoRI限制性酶切位點與表達載體pET-26b連接，隨后將質粒轉化入大腸桿菌BL21(DE3)獲得高效可溶表達，獲得天然結構的酸性成纖維細胞生長因子蛋白。但是該方法存在操作復雜的缺陷。

發明內容

針對相關技術中的上述技術問題，本發明提出一種高表達AFGF的方法，能夠克服現有技術的上述不足。

為實現上述技術目的，本發明的技術方案是這樣實現的：

一種高表達AFGF的方法，該方法包括以下步驟：

S1骨髓細胞生長到密度為95％時進行傳代；

S2吸出培養液，加入生理鹽水并晃動，棄生理鹽水；

S3加入胰酶，室溫消化，使細胞全部懸浮，加入培養基，終止消化；

S4吸取細胞懸液放入離心管離心；

S5離心后棄上清，加入生理鹽水，吸取一滴細胞計數，離心；

S6離心后棄生理鹽水，用培養基懸細胞加入含培養基的培養瓶中；

S7向所述培養瓶中加入10-10000ng/mL胞壁酰二肽(Muramyldipeptide，MDP)進行誘導；

S8將S7中傳代結束的培養瓶放入低溫低氧的培養箱中進行培養。