[發明專利]一株產漆酶的粗毛革孔菌NCULAC F1及制備高活力漆酶液的方法

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• 申請號: 202111047530.8
• 申請日: 2021-09-08
• 公開（公告）號: CN113604366A
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發明（設計）人: 巫小丹;岑慶靜;盧艷娟;崔憲;劉玉環;徐立娜;付桂明;洪妮;李緒;萬輝;劉薇
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/02;C12R1/645
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 王煥巧

本發明公開了一株產漆酶的粗毛革孔菌NCULAC F1，于2021年6月17日保藏于中國典型培養物保藏中心，其保藏編號為CCTCC No.M2021731，保藏地址為湖北省武漢市武昌區八一路299號。本發明的粗毛革孔菌NCULAC F1具有如下特征：產漆酶活力高，所產漆酶具有良好的熱穩定性，并且對金屬離子和有機溶劑等具有較高的耐受性。本發明利用粗毛革孔菌NCULAC F1作為產酶菌株，在PDA液體培養基中適量添加硫酸銅大大提高粗毛革孔菌表達高活力的胞外漆酶產量。本發明提供的通過添加硫酸銅提高粗毛革孔菌NCULAC F1制備高活力漆酶粗酶液的方法，具有操作簡便、工藝簡單、重復性好等特點，所制備的漆酶液活力較高，在工業領域具有良好的應用潛力和開發利用前景。

技術領域

本發明涉及微生物酶學領域，特別涉及一株產漆酶的粗毛革孔菌NCULAC F1及制備高活力漆酶液的方法。

背景技術

漆酶(laccase，EC 1.10.3.2，簡稱Lac)是一種多酚氧化酶，底物非常廣泛，對酚類、芳胺類等物質均具有良好的氧化效果，在紙漿漂白、含酚廢水處理、染料脫色和食品工業等領域得到廣泛應用。隨著生物技術的快速發展，眾多工業領域對高活性漆酶的需求不斷增加，而其生產成本、產量和生產效率成為了影響漆酶產業發展的重要因素。特別地，漆酶的產量是其產業化應用的前提，產量的不足直接制約其應用水平。

漆酶的來源非常廣泛，包括細菌、真菌、高等植物和昆蟲等生物。真菌來源的漆酶易于人工生產，具有較大的發展潛力。長期以來，有關真菌漆酶的研究多見于白腐真菌，其具有較強的生產木質素降解酶系的能力，是真菌漆酶的最主要來源，其中大多數為擔子菌。研究較為廣泛的擔子菌除了常見的糙皮側耳(Pleurotus ostreatus)、香菇(Lentinulaedodes)、杏鮑菇(Pleurotus eryngii)等食用菌外，還有其他類型白腐菌，如灰樹花(Grifola frondosa)、云芝(Trametes versicolor)、樹舌靈芝(Ganoderma applanatum)、黃孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)、血紅密孔菌(Pycnoporus coccineus)、毛栓菌(Trametes hirsuta)、硬毛粗蓋孔菌(Funalia trogii)、偏腫革裥菌(Lenzitesgibbosa)等也被發現具有較強的產漆酶能力。特別地，粗毛革孔菌(Coriolopsis gallica)是目前文獻報道中具有較強漆酶生產能力的白腐菌之一，其隸屬于真菌界，擔子菌門，傘菌綱，多孔菌目，多孔菌科，革孔菌屬，是一類重要的絲狀白腐真菌，廣泛分布于自然界。與普通食用菌相比，粗毛革孔菌生長速度較快，產漆酶水平較高，具有較大的應用潛力。

白腐菌仍然是目前大量獲取真菌漆酶的主要來源，高產漆酶白腐菌菌株的篩選和產酶條件優化對提高漆酶的生產效率和促進漆酶規模化生產具有重要的作用，可以滿足工業對高活力漆酶日漸增長的需求。

發明內容

本發明的目的是針對目前利用真菌發酵生產漆酶存在酶活力不高的問題，提供一株高產漆酶的白腐真菌-粗毛革孔菌、利用其制備高活力漆酶液的方法。

本發明通過以下技術方案予以實現：

本發明提供一株粗毛革孔菌(Coriolopsis gallica)，命名為粗毛革孔菌NCULACF1，2021年6月17日保藏于中國典型培養物保藏中心，菌種保藏編號為CCTCC No.M2021731，保藏地址為湖北省武漢市武昌區八一路299號武漢大學校內。該粗毛革孔菌可高效生產胞外漆酶，實現粗毛革孔菌在制備高活力漆酶液中的應用。

本發明還提供利用粗毛革孔菌NCULAC F1生產胞外漆酶并制備高活力漆酶液的方法，具體包括以下步驟：

(1)將粗毛革孔菌NCULAC F1的菌絲懸浮液接種于液體產酶培養基中，所述培養基含有馬鈴薯浸出粉6g/L、葡萄糖20g/L、硫酸銅0.5-1.0mM，在26±2℃、100-130rpm搖瓶培養10-15d；