[發(fā)明專利]自身抗體在制備胰腺導管腺癌診斷試劑盒中的應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111042493.1
• 申請日: 2021-09-07
• 公開（公告）號: CN113777309A
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發(fā)明（設計）人: 莊麗萍;孟志強;王鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 復旦大學附屬腫瘤醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 陸懿

本發(fā)明涉及醫(yī)學生物檢測技術(shù)領域，提供了10種自身抗體：抗TSPAN18,ENTPD1,IZUMO4,DHRS7C,ATP5G1,SECTM1,CPT1A,SLC39A14,SLC7A4，LDLRAD4抗體的新用途，具體是在制備胰腺導管腺癌診斷試劑或診斷試劑盒中的應用，本發(fā)明進一步提供了利用針對上述10種自身抗體檢測來進行胰腺導管腺癌診斷的試劑盒。本發(fā)明的試劑盒和檢測方法簡便，可靠，周期短，特異性高，易于臨床推廣。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及醫(yī)學生物檢測技術(shù)領域，涉及10種自身抗體在胰腺導管腺癌診斷中的應用。

背景技術(shù)

胰腺導管腺癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC)是我國最常見的惡性腫瘤之一，約90％的胰腺癌為起源于腺管上皮的導管腺癌，具有發(fā)病率高、早期診斷困難、轉(zhuǎn)移復發(fā)早、預后差等特點，5年生存率僅9％^[1,2]。手術(shù)切除是早期PDAC首選及唯一的根治性治療方法，但約85％的PDAC診斷時已屬于局部晚期或伴有遠處轉(zhuǎn)移，不能手術(shù)切除，化療是這部分患者的主要治療措施，但易耐藥，療效差^[3]。因此，尋找高敏感性、高特異性的診斷標志物，提高早期診斷率仍是目前亟待解決的問題。

CA19-9是目前廣泛應用的PDAC診斷標志物。系列研究結(jié)果顯示，CA19-9診斷PDAC的中位敏感性和特異性分別為79％、82％^[4,5]。CA19-9診斷腫瘤大小≤2cm PDAC的敏感性更差，僅為48.4％^[6]。此外，CA19-9升高也常見于膽道惡性腫瘤、胰腺炎、黃疸等，出現(xiàn)假陽性，超15％的PDAC因Lewis抗原陰性等原因出現(xiàn)假陰性^[7-8]。因此需要聯(lián)合或?qū)ふ倚碌脑\斷標志物。

腫瘤免疫微環(huán)境是腫瘤的十大特征之一，機體的免疫系統(tǒng)在識別腫瘤這一“異物”時會產(chǎn)生針對腫瘤抗原的自身抗體。當腫瘤抗原水平很低，利用常規(guī)蛋白檢測方法無法檢測到時，免疫系統(tǒng)就能監(jiān)測到該蛋白的存在，引發(fā)免疫反應，產(chǎn)生大量抗體，對抗原信號起到一定的放大作用。因此，自身抗體的檢測比腫瘤抗原更加敏感，有可能為腫瘤早期診斷開辟新途徑。研究發(fā)現(xiàn)，多個自身抗體(如抗Ezrin、p53、p16、p62、survivin、Koc、IMP1等)與PDAC的發(fā)生發(fā)展有關(guān)^[9-10]，但這些自身抗體及其組合用于PDAC診斷的敏感性、特異性尚無系統(tǒng)研究，目前仍無對PDAC相關(guān)自身抗體的高通量篩查研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題進行，目的在于提供胰腺癌特別是胰腺導管腺癌的診斷標志物，本發(fā)明的目的也在于提供抗TSPAN18,ENTPD1,IZUMO4,DHRS7C,ATP5G1,SECTM1,CPT1A,SLC39A14,SLC7A4，LDLRAD4抗體的新用途，即在制備胰腺導管腺癌診斷試劑盒中的應用。

本發(fā)明的10種自身抗體采用HuProt^TM人類蛋白質(zhì)組芯片篩選得到，HuProt^TM人類蛋白質(zhì)組芯片最早由美國約翰霍普金斯大學開發(fā)，經(jīng)過不斷升級，目前含超過20000個人重組蛋白，是迄今為止最高通量人重組蛋白質(zhì)組芯片。我們首次將這個高通量的蛋白芯片用于PDAC的診斷。

先進行初篩，采集30例PDAC患者及30例健康人的血清樣本，每一個樣品使用1張HuProtTM蛋白質(zhì)芯片進行檢測，并以同一標準分析，如下：針對每一個蛋白，計算差異倍數(shù)(Fold change，F(xiàn)C)(PDAC組均值/健康組均值)以及P值(t檢驗)，篩選出符合條件的自身抗體:P值0.05，F(xiàn)C1.2，符合上述條件的蛋白，共計165個，其中響應抗體類型為IgG的83個，響應抗體為IgM的82個。