[發明專利]膽管癌術后生存預測方法、試劑盒以及試劑盒的應用方法

在審

• 申請號: 202111035161.0
• 申請日: 2021-09-05
• 公開（公告）號: CN113721019A
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 劉蘇來;林巍;宋穎輝
• 申請（專利權）人: 蘇州銀灣細胞生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G16H20/40;G16H50/20;G16H50/30;G16H50/50;G16B25/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.膽管癌術后生存預測方法，其特征在于，包括以下步驟：

獲取患者術后切除病灶的膽管癌病例標本以及對應的三葉因子家族基因表達水平；其中，所述三葉因子家族基因表達水平為膽管癌術后生存預測預后指標；

將所述三葉因子家族基因表達水平輸入至膽管癌預后預測模型中，得到所述膽管癌預后預測模型輸出的生存風險評分；其中，所述膽管癌預后預測模型是基于正常樣本對應的三葉因子家族基因表達水平和膽管癌樣本對應的三葉因子家族基因表達水平訓練得到的。

2.根據權利要求1所述的膽管癌術后生存預測預后指標檢測方法，其特征在于，所述膽管癌預后預測模型通過以下步驟訓練得到：

獲取所述正常樣本和所述膽管癌樣本；

獲取所述正常樣本對應的三葉因子家族基因表達水平和所述膽管癌樣本對應的三葉因子家族基因表達水平；

將所述三葉因子家族基因表達水平作為訓練使用的輸入數據，得到用于生成所述膽管癌病例標本的所述生存風險評分的所述膽管癌預后預測模型。

3.根據權利要求1所述的膽管癌術后生存預測預后指標檢測方法，其特征在于，所述三葉因子家族基因表達水平通過試劑盒檢測得到，所述試劑盒內包含有三葉因子家族抗體以及三葉因子家族抗-抗體。

4.試劑盒，用于檢測膽管癌測定標志物，其特征在于，所述試劑盒包括試劑盒一液和試劑盒二液，所述試劑盒一液內包含有三葉因子家族抗體，所述試劑盒二液內包含三葉因子家族抗-抗體。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述三葉因子家族包括三葉因子1、三葉因子2和三葉因子3。

6.基于權利要求4或5所述的試劑盒的應用方法，其特征在于，包括以下步驟：

膽管癌病例標本離體，并對離體的膽管癌病例樣本進行低溫保護；

石蠟包埋離體的膽管癌病例樣本的組織；

組織切片，并將包含有完整組織的載玻片置于40℃水體中；

撈出載玻片并放入37C℃溫箱中烘干；

依次將烘干后的載玻片放入二甲苯-二甲苯-100％酒精-100％酒精-95％酒精-90％酒精-80％酒精-70％酒精試劑中進行脫蠟；

脫蠟后的載玻片在清水中沖洗一段時間，加入3％H₂O₂溶液浸泡10min，然后倒掉3％H₂O₂溶液，在清水中洗兩次，再加入檸檬酸緩沖液，蒸煮3min，剛到沸騰即可，冷卻至室溫，然后再蒸煮一次，冷卻至室溫，使抗原的位點暴露；

倒掉檸檬酸緩沖液，清水中水洗2次以及磷酸鹽緩沖鹽溶液中洗2次，擦干組織周圍的磷酸鹽緩沖鹽溶液，馬上加上血清，然后放入37℃溫箱中30min；

將載玻片取出，用吸水紙擦干血清，加試劑盒一液，于4℃冰箱中保存過夜；

將載玻片從冰箱中取出，放入磷酸鹽緩沖鹽溶液中洗3次，擦干組織周圍的磷酸鹽緩沖鹽溶液后加上試劑盒二液，然后置于37℃溫箱中30min；

將載玻片從溫箱中取出,放入磷酸鹽緩沖鹽溶液中洗3次，擦干組織周圍的磷酸鹽緩沖鹽溶液后加上鏈霉親和素-生物素復合物，然后置于37℃溫箱中30min；

將片子從溫箱中取出,放入磷酸鹽緩沖鹽溶液中洗3次，擦干組織周圍的磷酸鹽緩沖鹽溶液后加上顯色劑。

將顯色后載玻片子用清水沖洗一段時間后，浸泡于蘇木精中進行復染染色；將復染后的載玻片置于清水中水洗后，依次將載玻片放入70％酒精-80％酒精-90％酒精-95％酒精-100％酒精-100％酒精-二甲苯-二甲苯，最后浸泡在二甲苯中，搬到通風柜中；用中性樹膠滴在組織旁邊，再用蓋玻片蓋上，封好的載玻片后置于通風柜中晾干。

7.根據權利要求6所述的試劑盒的應用方法，其特征在于，所述切片的厚度為5μm。

8.根據權利要求6所述的試劑盒的應用方法，其特征在于，所述依次將烘干后的載玻片放入二甲苯-二甲苯-100％酒精-100％酒精-95％酒精-90％酒精-80％酒精-70％酒精試劑中進行脫蠟步驟中，每種試劑中均放入10min。