[發(fā)明專利]用于檢測華氏巨球蛋白血癥相關基因突變的數(shù)字PCR試劑盒及引物和探針

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111031230.0
• 申請日: 2021-09-03
• 公開（公告）號: CN113736880B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發(fā)明（設計）人: 繆祎;李建勇;朱華淵;范磊;秦姝超;肖曉;劉以哲;謝立群;熊慧
• 申請（專利權）人: 江蘇省人民醫(yī)院（南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院）;蘇州云泰生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京和信華成知識產權代理事務所(普通合伙) 11390
• 代理人: 李研暾

本發(fā)明涉及生物檢測領域，具體講，涉及一種用于檢測華氏巨球蛋白血癥(WM)相關基因突變的數(shù)字PCR試劑盒及引物和探針。本發(fā)明的試劑盒中含有用于檢測CXCR4S338X位點的突變的引物和探針。本發(fā)明試劑盒采用數(shù)字PCR技術，對人類CXCR4S338X突變位點進行定量檢測，為臨床醫(yī)生對WM患者靶向用藥的療效監(jiān)測及臨床用藥提供參考。

技術領域

本發(fā)明涉及生物檢測領域，具體講，涉及一種用于檢測華氏巨球蛋白血癥相關基因突變的數(shù)字PCR試劑盒及引物和探針。

背景技術

華氏巨球蛋白血癥(Waldenstrom?macroglobulinemia，WM)是一種惰性B細胞腫瘤，1944年由瑞典學者Jan?G.Waldenstrom首次報道。WHO將其定義為分泌單克隆免疫球蛋白M(immunoglobulin?M，IgM)的淋巴漿細胞淋巴瘤。2012年，Treon等證實9?1％的WM患者存在MYD88^L265P基因突變。2014年，Hunter等發(fā)現(xiàn)CXCR4^WHIM突變在WM患者中占27％。這兩個重現(xiàn)性體細胞突變的發(fā)現(xiàn)，為華氏巨球蛋白血癥的診斷、治療及預后評估揭開了新篇章。

CXCR4^WHIM突變是一種體細胞突變，該突變最早在WHIM綜合征(以疣、低丙種球蛋白血癥、感染、粒細胞缺乏為特征的免疫缺陷病)中發(fā)現(xiàn)。CXCR4^WHIM在WM中的體細胞突變是該基因首次在癌癥中發(fā)現(xiàn)的體細胞突變，其一般為雜合突變。突變可分為無義突變(nonsense,NS)(也稱為CXCR4^WHIM/NS)和移碼突變(frame?shift,FS)(也稱為CXCR4^WHIM/FS)兩類。CXCR4^WHIM突變中最為常見的是S338X點突變；S338X突變有兩種類型：一種突變是CG，另一種是CA。CXCR4^WHIM突變可導致CXCR4蛋白結構C末端產生異常，使得具有調節(jié)功能的絲氨酸丟失，導致CXCR4的內化受損和激活延長。CXCR4與其配體CXCL12結合后，使得絲氨酸/蘇氨酸激酶和絲裂原活化蛋白激酶信號系統(tǒng)異常活化；同時，CXCR4對于淋巴漿細胞的存活、跨內皮細胞遷移歸巢及黏附于骨髓基質都有很大作用。CXCR4^WHIM突變率在WM患者中僅次于MYD88^L265P突變，突變比率25％-30％。而在其他B細胞淋巴瘤如B-CLL、毛細胞性白血病及漿細胞病如多發(fā)性骨髓瘤和輕鏈型淀粉樣變中均未發(fā)現(xiàn)突變。

MYD88^L265P和CXCR4^WHIM突變狀態(tài)對于WM患者具有一定的臨床預后意義。分析顯示:①MYD88^L265PCXCR4^WHIM/NS雙突變患者的骨髓腫瘤負荷最重、血清IgM水平最高、起病時癥狀最多；②MYD88^L265PCXCR4^wT及MYD88^L265PCXCR4^WHIM/FS患者的骨髓腫瘤負荷居中；③MYD88^wTCXCR4^wT患者的骨髓腫瘤負荷最輕；④MYD88^L265PCXCR4^WHIM相對MYD88^L265PCXCR4^wT患者較少出現(xiàn)淋巴結腫大；⑤MYD88^wT患者的死亡風險更高，而CXCR4^WHIM突變與生存預后無關。因此，將MYD88和CXCR4兩種基因突變情況相結合，可以得到更為精準的臨床預后提示。

鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內容

本發(fā)明的首要發(fā)明目的在于提供一種用于檢測華氏巨球蛋白血癥相關基因突變的數(shù)字PCR試劑盒。

本發(fā)明的第二發(fā)明目的在于提供該試劑盒的使用方法。

本發(fā)明的第三發(fā)明目的在于提供用于檢測華氏巨球蛋白血癥相關基因突變的引物和探針。