[發明專利]一種生物樣品的預處理方法

在審

• 申請號: 202111027594.1
• 申請日: 2021-09-02
• 公開（公告）號: CN113917051A
• 公開（公告）日: 2022-01-11
• 發明（設計）人: 彭愛華;曹鈺;劉鵬;姚蓉;唐時元;劉伯夫;張舜杰;湯明海
• 申請（專利權）人: 四川大學華西醫院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06
• 代理公司: 成都三誠知識產權代理事務所(普通合伙) 51251
• 代理人: 饒振浪

本發明公開了一種生物樣品的預處理方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟1：配制洗脫溶劑體系，并將上相和下相分裝待用；其中任意一相作為流動相，另一相作為固定相；所述洗脫溶劑體系包括至少2種組合后能形成互不相溶的兩相溶液的溶劑；步驟2：采集血液、尿液或嘔吐物；步驟3：將固定相、流動相以及步驟2中的采集物通入逆流色譜儀進行洗脫，收集洗脫液。本發明可以適用于更多種類的毒物，擴大應用場景；另外，采用本發明的預處理方法，可能提高樣品中毒物的回收率，利于后續對有毒物質的定性定量分析。

技術領域

本發明涉及醫學檢驗分析技術領域，具體是指一種生物樣品的預處理方法。

背景技術

近年來，農藥中毒、藥物中毒、食物中毒的事件屢有發生，危害廣大人民群眾的生命健康。當有人出現中毒送醫時，通常需要采集患者的血樣、嘔吐物、尿液、糞便等生物樣品，并對生物樣品進行預處理后再對中毒物質進行定性定量分析。現有的生物樣品的預處理方法主要有：萃取法、蛋白沉淀法和固相萃取小柱法。上述方法在對生物樣品進行預處理時會存在一些問題：

萃取法采用在血漿或尿液中直接加入與之不相溶的有機溶劑，如乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷等，利用樣品在有機溶劑中溶解度更大的原理，將待檢測樣品從血漿或尿液中萃取到有機溶劑中，再揮發有機溶劑，達到去除雜質富集樣品的目的。萃取法雖然操作簡單，適用于極性較小的化合物，但對易溶于水的化合物不太適用。

蛋白沉淀法是在血漿樣品中加入一定量的與水能互溶的有機溶劑，使血漿中的蛋白質沉淀，通過離心除去蛋白，待檢測化合物溶解于有機溶劑中，再進行檢測。加入的有機溶劑通常是乙腈、甲醇等。影響蛋白沉淀法效果的因素主要有兩個：待測物質與血漿蛋白結合的緊密程度和待測物質在使用的有機溶劑中的溶解度。當待測物質與血漿蛋白結合較緊密時，或當待測物質的溶解度較低時，樣品預處理會造成待測物質的損失。

固相萃取小柱是近年來應用較廣的一種樣品預處理方法，其本質是利用各種不同性質的固體填料，將待測化合物吸附，使之與蛋白等雜質分離，從而達到富集化合物，除去影響檢測的雜質的目的。但是，固相萃取小柱的填料類型較多，需要根據目標化合物的性質進行篩選，不適合廣譜的篩查。

逆流色譜是一種基于液-液連續萃取的分離技術，利用樣品在兩相溶劑體系中的分配系數不同而達到分離效果。現階段逆流色譜主要應用于天然產物或者合成化合物的分離純化。由于逆流色譜法避免了可能有死吸附的固體填料，所以具有回收率高的特點，這一特點適合天然生物樣品的預處理，目前還未看到有將血樣、嘔吐物、尿液采用逆流色譜法進行預處理的相關報道，因此本發明提供一種基于逆流色譜法來對血樣、嘔吐物、尿液進行預處理的方法來解決上述萃取法、蛋白沉淀法和固相萃取小柱法所存在的問題。

發明內容

本發明的目的在于解決上述問題，提供一種夠適用于大范圍檢測，并且毒物回收效率高的生物樣品預處理方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種生物樣品的預處理方法，包括以下步驟：

步驟1：配制洗脫溶劑體系，并將上相和下相分裝待用；其中任意一相作為流動相，另一相作為固定相；所述洗脫溶劑體系包括至少2種組合后能形成互不相溶的兩相溶液的溶劑；

步驟2：采集血液、尿液或嘔吐物；

步驟3：將固定相、流動相以及步驟2中的采集物通入逆流色譜儀進行洗脫，收集洗脫液。

進一步的，步驟2中還包括對采集物進行離心，提取上層液體；步驟3則將固定相、流動相以及上層液體通入逆流色譜儀進行洗脫，收集洗脫液。

步驟3之后還包括以下步驟：將洗脫液濃縮至干，得到供試樣品。

步驟1中所述的溶劑包括正己烷、正庚烷、正戊烷、環己烷、氯仿、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、甲苯、苯甲醇、甲醇、正丁醇、異丁醇、正丙醇、四氫呋喃、乙醇、乙二醇、乙酸、甲酸、水。