[發明專利]一種GA-T細胞及其制備方法以及在白血病和抗GVHD中的應用

有效

• 申請號: 202111025332.1
• 申請日: 2021-09-02
• 公開（公告）號: CN113584012B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 張玲玲;梅旦;薛子揚;張賢政;于倩倩
• 申請（專利權）人: 安徽醫科大學
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/02;A61K35/17;A61P35/02;A61P37/06
• 代理公司: 北京知文通達知識產權代理事務所(普通合伙) 16051
• 代理人: 歐陽石文

本發明公開了一種GA?T細胞及其制備方法以及在白血病和抗GVHD中的應用，該GA?T細胞由內到外順次為細胞內層、第1明膠層、第1海藻酸鈉層、……、第n明膠層、第n海藻酸鈉層，其中n為大于等于1的自然數。本申請中GA?T能夠有效地緩解小鼠GVHD的臨床表現，并且發揮較好的腫瘤殺傷作用。臨床上由于供體和受體的人類白細胞抗原(Human?Leukocyte?Antigen,HLA)不匹配而導致的可用供體骨髓不足。異體來源的T細胞的分選擴增十分容易獲取，GA?T也就解決了供體骨髓不足的問題，在實現免疫隔離的同時發揮腫瘤殺傷作用。

技術領域

本發明涉及一種GA-T細胞及其制備方法以及在白血病和抗GVHD中的應用。

背景技術

細胞治療包括植入或輸送活細胞并維持其在患者中的存活，以治療某種疾病。細胞治療的優勢在于提供了能夠調節其功能、感知和響應其環境的復雜生物實體。細胞的遷移和增殖能力、治療藥物的提供以及細胞間的相互作用是可以被調控的，以應對各種病理中的持續挑戰，包括糖尿病、白血病、實體瘤、脊髓損傷以及自身免疫和神經退行性疾病。

白血病有四種主要類型：急性淋巴細胞白血病(acute?lymphocytic?leukemia，ALL)，急性髓細胞性白血病(acute?myelocytic?leukemia，AML)，慢性淋巴細胞性白血病(chronic?lymphocytic?leukemia，CLL)和慢性粒細胞白血病(chronic?myelogenousleukemia，CML)。異基因造血干細胞移植(hematopoietic?stem?cell?transplantation，HSCT)是目前臨床根治血液系統惡性腫瘤的主要方法。移植的供體T細胞通過促進宿主免疫系統重建介導移植物抗白血病(graft-versus-leukemia，GVL)效應，但是供體T細胞在發揮GVL效應同時，也參與了威脅生命的嚴重并發癥—移植物抗宿主疾病(graft-versus-hostdisease，GVHD)。目前GVHD仍是移植失敗引起死亡的主要原因，是移植的首要障礙，特別是急性GVHD(acute?GVHD，aGVHD)。

免疫隔離(immune-isolation)技術是將需要移植的細胞或組織包被于選擇透過性膜微囊中，移植物與宿主免疫系統隔離，有效避免異體移植的免疫排斥反應。目前該技術已用于糖尿病、神經變性疾病、心血管疾病等多種疾病的治療研究。常用的微囊化材料是生物相容性的，包括明膠(gelatin)、海藻酸鈉(alginate)、殼聚糖(chitosan)、多聚賴氨酸(poly-L-lysine，PLL)、透明質酸(hyaluronic?acid)等。

層層(layer-by-layer，LBL)自組裝技術使帶負電的陰離子聚合物與帶正電的陽離子聚合物通過靜電相互作用形成多層材料薄膜的微囊。各種帶電物質，如多價離子、低聚物、蛋白質和帶電粒子可被用作膠囊的包被材料。多種材料間的相互作用為精確控制LBL自組裝性能以及精確調節膠囊壁的厚度提供了發展前景。通過物理化學等方法控制LBL多層膜的結合或整合營養因子等方法調節細胞層的功能，這些細胞隨后可用于移植治療實驗。

傳統的細胞包被技術如微流體技術、電噴霧技術包封形成多細胞包被的微囊系統體積較大，體內輸注易引起血管阻塞，不適用于血液疾病的治療。

利用LBL自組裝技術制備出的微囊粒徑較小，機械強度高且微囊表面光滑圓整。囊壁是半通透性膜，允許氧、營養、代謝產物和小分子蛋白質自由穿過，具有免疫活性的大分子物質如免疫細胞、分子量大于71KD的葡聚糖分子和免疫球蛋白IgG(分子量150KD)等不能通過，從而保護囊殼內組織或細胞不被免疫系統攻擊。細胞因子如IL-2(分子量15KD)、IFN-γ(分子量16.3KD)、TNF-α(分子量25KD)等，多數分子量不超過60KD，可自由穿過微囊。

上述背景技術是為了便于理解本申請，并非是申請本申請之前已向普通公眾公開的公知技術。

發明內容