[發明專利]菠蘿葉片高效離體再生方法

有效

• 申請號: 202111025299.2
• 申請日: 2021-09-02
• 公開（公告）號: CN113575422B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 鄭珂媛;朱木蘭;周慧晶;孫婧朗
• 申請（專利權）人: 中國科學院分子植物科學卓越創新中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 歐陽石文

1.一種菠蘿葉片高效離體再生方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）愈傷組織誘導：

a) 取菠蘿消毒后的幼嫩無菌葉片或組培苗的葉片接種至愈傷誘導培養基I，所述愈傷誘導培養基I是MS基本培養基+2-4mg/L 6-BA+0.2-0.4mg/L NAA+0.1 g/L肌醇，暗培養10-20天；

b) 將上述暗培養后的材料轉入愈傷誘導培養基II，所述愈傷誘導培養基II是MS基本培養基+2-3mg/L NAA+0.2-0.3mg/L 6-BA+0.5-1.5mg/L TDZ+0.1 g/L肌醇+0.5 g/L脯氨酸，光照培養；

（2）不定芽誘導：將第（1）步獲得的愈傷組織接種至不定芽誘導培養基I，所述不定芽誘導培養基I是MS基本培養基+1.5-2.5mg/L 6-BA與0.15-0.25 mg/L NAA+0.1 g/L肌醇，光照培養，每日32℃-37℃培養12-18 h和22℃-28℃培養6-12 h，培養10-20天后轉入不定芽誘導培養基II，所述不定芽誘導培養基II是MS培養基+0.3-1mg/L 6-BA+0.03-0.1 mg/L NAA+0.1 g/L肌醇，培養20-35天；

（3）不定芽伸長：將第（2）步獲得的不定芽轉入不定芽伸長培養基，所述不定芽伸長培養基是MS基本培養基+0.1-0.5mg/L 6-BA+0.01-0.05 mg/L NAA+0.01-0.1 mg/L獨腳金內酯+0.1 g/L肌醇，光照培養20-40天；

（4）生根培養：將第（3）步中不定芽誘導出的叢芽分成單株，接種至生根培養基中，誘導生根實現再生。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈傷誘導培養基I中 6-BA為3mg/L，NAA為0.3mg/L。

3. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈傷誘導培養基II中 NAA為2mg/L，6-BA為0.2mg/L，TDZ為1mg/L。

4. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，不定芽誘導培養基I中 6-BA 2mg/L， NAA為0.2 mg/L，光照培養，每日35℃培養15-17 h和25℃培養7-9 h。

5. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，不定芽誘導培養基II中6-BA為0.5mg/L，NAA為0.05 mg/L。

6. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述不定芽伸長培養基中 6-BA為0.3mg/L，NAA為0.03 mg/L，獨腳金內酯為0.05 mg/L。

7. 如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述生根培養基是1/2MS基本培養基+0.1-1mg/L吲哚丁酸，培養14-21 d至生根。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，進一步包括下述步驟：

（5）煉苗：挑選步驟（4）中已生根且長勢健壯的瓶苗進行煉苗。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述煉苗方法為：將培養瓶蓋打開，注入0.5-1cm清水，置于室溫、自然光照下，靜置2-3天，將瓶苗掏出，將基部附著的培養基洗凈，準備移栽。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，進一步包括下述步驟：

（6）移栽：將步驟（5）煉苗后再生苗進行移栽。

11.如權利要求10所述的方法，其特征在于，所述移栽中，移栽基質為泥炭土：珍珠巖：蛭石=3：1：1，移栽前將基質連盆浸入水中使其完全潤濕，移栽后套袋保濕，濕度不夠時使用噴壺噴灑植株表面，待苗生長強健后除去套袋，正常養護。

12.如權利要求1至7任一項所述的方法，其特征在于，所述光照培養的光照強度為2000-3000lx。