[發明專利]一種螺旋藻免疫活性肽及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202111021172.3
• 申請日: 2021-09-01
• 公開（公告）號: CN113583087B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 任迪峰;翟鑫禹;王子純;王倩
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: C07K5/113
• 分類號: C07K5/113;C07K5/093;C07K5/083;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C12P21/06;A61P37/04
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 賈耀淇

本發明屬于食品深加工技術領域，具體涉及一種提取自螺旋藻粉的免疫活性肽及其制備方法與應用。所述免疫活性肽為Asp?Leu?Pro?Trp(C端為Trp，N端為Asp)、Asp?Pro?Phe(C端為Phe，N端為Asp)、Gly?Phe?Pro(C端為Pro，N端為Gly)。為了獲取含有上述免疫活性肽的產品，本發明以螺旋藻粉為原料，采用堿提酸沉法提取螺旋藻粉的蛋白，再用胰蛋白酶酶解，酶解液經過超濾分離，得到0?5KDa分子量的免疫多肽，最終得到免疫活性的多肽(DLPW、DPF、GFP)，有利于提高巨噬細胞RAW264.7吞噬中性紅的能力，具有免疫活性。

技術領域：

本發明屬于食品深加工技術領域，具體涉及一種提取自螺旋藻粉的免疫活性肽及其制備方法與應用。

背景技術：

免疫是人體的一種生理功能，人體依靠這種功能識別“自己”和“非己”成分，從而破壞和排斥進入人體的抗原物質(如病菌等)，或人體本身所產生的損傷細胞和腫瘤細胞等，以維持人體的健康。免疫系統分為先天免疫和適應性免疫。先天免疫是非特異性的，主要通過機體的天然屏障(如皮膚和黏膜)、生理學防御(低pH、溫度和化學介質)、細胞(如巨噬細胞、多形核白細胞、樹突狀細胞)和自然殺傷(NK)細胞或炎癥因子(如細胞因子)提供第一道防御。適應性免疫對潛在危險的外來抗原具有高度特異性，可分為細胞免疫和抗體介導的體液免疫，而T淋巴細胞(T細胞)和B淋巴細胞(B細胞)是適應性免疫中最重要的細胞。免疫功能直接關系到機體能否抵御外來異物(包括微生物)的入侵，清除機體變性壞死和變異的細胞，在維持機體穩態方面發揮著不可替代的作用。

生物活性肽一直是生命和食品科學領域的研究熱點之一。近年來，國內外諸多研究證實了免疫活性肽在細胞和動物水平均具有良好的免疫功能。免疫活性肽是一類具有促進淋巴細胞分化成熟、增強機體免疫機能等生物學功能的多肽。免疫活性肽的分子質量一般較低，在生物體內的含量也較少，具有促進淋巴細胞分化和成熟，增強巨噬細胞的吞噬功能的作用,它提高機體抵御外界病原體感染的能力，增強人體的免疫功能，在人類營養健康和疾病調節中發揮著不可替代的作用。到目前為止，科研工作者已從乳蛋白、大豆蛋白、大米蛋白、魚貝類蛋白、膠原蛋白等蛋白酶解物中分離出多種具有免疫活性的肽段，并將其應用于細胞、動物實驗及臨床研究，取得了顯著效果。

鈍頂螺旋藻(Spirulina platensis)是一種光養生絲狀藍綠色微藻，它主要的光合產物是蛋白質，碳水化合物，脂質，其中蛋白質含量所占比例最高。螺旋藻具有許多生理功能，如抗菌、抗癌、降血糖、降膽固醇、抗氧化劑、免疫調節和抗炎活性等一系列功能作用。已有研究表明，螺旋藻含有大量的蛋白質，由18種氨基酸組成，包含人體全部8種必需氨基酸，這為開發螺旋藻生物活性肽提供了良好的物質基礎。

本研究以螺旋藻粉為原料，利用酶解法制備螺旋藻多肽，采用超濾等方法分離純化螺旋藻蛋白酶解液，并測定其對小鼠巨噬細胞RAW264.7吞噬中性紅能力的影響，篩選出免疫活性高的螺旋藻多肽組分，對該螺旋藻多肽組分進行液質分析，確定螺旋藻多肽的氨基酸序列。利用計算機分析軟件，依據多肽的氨基酸組成分析及庫比對，確定免疫活性強的目標特征肽段，人工合成目標肽段并進行活性測定。

發明內容：

本發明提供的技術方案之一，是提取自螺旋藻粉的免疫活性肽，所述所述免疫活性肽的氨基酸序列為Asp-Leu-Pro-Trp(C端為Trp，N端為Asp)，以下簡稱DLPW；所述免疫活性肽的氨基酸序列為Asp-Pro-Phe(C端為Phe，N端為Asp)，以下簡稱DPF；所述免疫活性肽的氨基酸序列為Gly-Phe-Pro(C端為Pro，N端為Gly)，以下簡稱GFP。

所述免疫活性肽DLPW、DPF、GFP可通過人工合成的方式獲得，也可通過對螺旋藻粉酶解篩選獲得；

本發明還提供獲取上述多肽的方法，具體如下：