[發明專利]一種杏香兔耳風種質改良方法

有效

• 申請號: 202111021159.8
• 申請日: 2021-09-01
• 公開（公告）號: CN113598055B
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 鄧國賓;曾祥飛;向建英;張媛;張文娟
• 申請（專利權）人: 西南林業大學;云南植蟲藥生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H6/14;A01G24/28;A01G24/25;A01G24/10;A01G22/00
• 代理公司: 昆明盈正知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 53208
• 代理人: 徐洪剛

本發明涉及一種中藥材的種質改良方法，步驟包括：A種質選擇、B種質改良、C改良種質鑒定與篩選、D改良種質生根、E生根苗馴化和F改良種質種子獲得；本發明利用秋水仙素對杏香兔耳風無菌不定芽進行多倍體誘導，后通過形態學鑒別法和染色體壓片法篩選并純化培養獲得改良杏香兔耳風種質，獲得率為19％；本發明所獲得改良杏香兔耳風種質，莖具有明顯增粗，葉具有明顯增厚表現，且單株生物量較原母本高1.9倍，畝產較原母本高1.6倍，同時，綠原酸含量較母本高1.3倍，原兒茶酸含量較原母本高2.2倍；本發明所獲得的優質種質，具有遺傳穩定性，通過種子種植出的植株仍具有可育性。

技術領域

本發明涉及一種中藥材的種質改良方法，屬于植物作物育種及中藥材種植領域，特別涉及杏香兔耳風種質改良方法。

背景技術

香兔耳風Ainsliaea fragrans Champ為菊科兔耳風屬植物，以全草入藥，具有清熱解毒，利濕，止血的功效，主要用于治肺癰，乳腺炎，疳積，骨髓炎，毒蛇咬傷。杏香兔耳風主要分布于臺灣、福建、浙江、安徽、江蘇、江西、湖北、四川、湖南、廣東、廣西、云南等省，生于海拔30～850米的山坡灌木林下或路旁、溝邊草叢中，云南在海拔2000米附近亦有分布。杏香兔耳風內含綠原酸、芹菜素、槲皮素、木犀草素、3,5-二咖啡酰奎寧酸等，其中，一般制藥企業的內檢藥材標準，將綠原酸含量高低作為杏香兔耳風的質量的核心指標，同時，其含量愈高，在臨床上的藥效越佳。然而目前，杏香兔耳風主要來源于野生資源，各批次其含量差異極大，使得各相關藥企、科研單位開始進行杏香兔耳風的選種育種工作。

多倍體是普遍存在于自然界中，是生物自身體細胞中具有三組或三組以上的染色體，常見于高等植物中，許多植物在進化的過程都經歷了“多倍體化”與“二倍體化”，具資料統計，種子植物中的528個屬1171個種中約38.71％是多倍體，其中被子植物約50％是多倍體。

由于多倍體具有莖葉增大增厚、抗逆性強、次生代謝產物增多等特點，使得多倍體逐漸成為作物育種的重要方式，如多倍體的草莓，比普通的二倍體大2～4倍，三倍體的西瓜，一方面其果實較二倍體大，且含糖量比二倍體高10％以上，同時因為三倍體，造成不育，形成無籽西瓜，更加方便食用。而在藥用植物的育種上，由于多倍體的優良特性，藥用植物多倍體人工育種將是藥用植物品種改良的重要方式。如潘中華等發表的《金銀花新品種“九豐1號”及栽培技術》，報道了多倍體金銀花(九豐一號)，經測定其綠原酸含量較二倍體增加了30％，且產量增加了58.7％；杜弢等發表的《四倍體黃芩D20引種實驗報告》，報道了四倍體黃芩產量高于普通二倍體52.5％，黃芩苷含量、浸出物等均高于二倍體。

雖目前部分制藥企業篩選了高含量的杏香兔耳風品種，意在進行推廣種植，但由于種植產量極低，推廣種植成為難點。本發明團隊成員于2018年進行了未改良種質的杏香兔耳風進行了栽植測產，畝栽植2萬株未改良種質的杏香兔耳風組培苗，栽植一年后測產為畝產約90公斤，產量極低。

發明內容

本發明針對現有品種杏香兔耳風產量低，有效成分含量不特別突出等缺點，特利用現代生物育種技術，對杏香兔耳風染色體進行加倍，提高了杏香兔耳風的單株產量以及綠原酸與原兒茶酸等活性成分含量。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：一種杏香兔耳風種質改良方法，包括如下步驟，

A、種質篩選：選擇有效成分含量高，單株生物量大的優質種質作為母本；

B、種質改良；

B1材料清洗：選取健壯、無病蟲害幼嫩莖段進行清洗；

B2無菌體系建立：將清洗完成的材料，轉移至超凈工作臺，消毒后去掉兩端傷口，將其剪成1.0～2.0cm大小的帶芽小段，按極性接種于不定芽培養基上，溫度23～27℃、光照強度2000～3000Lux，單日光照時間12h環境下培養30～40天；

B3多倍體誘導：將培養出的無菌不定芽剪成單芽，置于無菌誘導液中，在23～27℃下黑暗浸泡48～60h進行誘導；