[發明專利]一種同時檢測克羅諾桿菌和沙門氏菌的引物組合、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202111018531.X
• 申請日: 2021-08-31
• 公開（公告）號: CN113699258A
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 滿朝新;姜毓君;秦雪;付世騫;楊鑫焱
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/42;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

本發明公開了一種同時檢測克羅諾桿菌和沙門氏菌的引物組合、試劑盒及其應用，屬于食品安全技術領域。為了解決傳統微生物學方法檢測沙門氏菌和克羅諾桿菌中存在的問題，本發明提供一種基于LAMP反應的雙重試紙條和引物組合如SEQ ID NO:1?8所示，步驟為提取沙門氏菌和克羅諾桿菌DNA并經過LAMP反應擴增出大量目標產物，通過在穩定膠體金、金標抗體、復溶液和稀釋液制備的基礎上構建的雙重試紙條對結果進行肉眼直接判讀。本發明獲得的雙重試紙條具有制作簡單、成本低廉以及檢測靈敏等優點，可用于同時檢測食品及食品加工過程中的沙門氏菌和克羅諾桿菌污染，尤其是嬰幼兒配方乳粉中的致病菌污染。

技術領域

本發明屬于食品安全技術領域，具體一種同時檢測克羅諾桿菌和沙門氏菌的引物組合、試劑盒及其應用。

背景技術

近年來，隨著一系列涉及食源性致病菌的奶粉召回和重大感染事件的爆發，乳中致病菌的污染問題引起了全世界的關注。乳粉中食源性致病菌包括克羅諾桿菌、大腸埃希氏桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、檸檬酸桿菌、陰溝腸桿菌和單核細胞增多性李斯特菌等，其中嚴重威脅嬰兒健康以及生命安全的種類主要為克羅諾桿菌和沙門氏菌。

沙門氏菌，是全球范圍內最常見的食源性致病菌之一，屬于腸桿菌科家族中的一種能運動、無芽孢的兼性厭氧革蘭氏陰性菌，當人體感染沙門氏菌12到14小時后，便會出現許多臨床癥狀，例如：惡心、腸胃炎以及嘔吐等。在沙門氏菌屬中，致病性較強的有腸炎沙門氏菌和鼠傷寒沙門氏菌兩種。奶粉和嬰兒配方乳粉中污染了非傷寒沙門氏菌是造成嬰幼兒腹瀉、敗血癥和腦膜炎等癥狀的重要原因，并且低水平的污染便可以產生感染的爆發，因此，尤以牛奶為原料的食品進行沙門氏菌的快速檢測在食品安全領域有著極其重要的意義。

克羅諾桿菌屬是腸桿菌科的一員，該菌是兼性厭氧型的革蘭氏陰性致病菌，被定義為一種能夠危及嬰幼兒特別是新生兒生命的致病微生物，會引起新生兒嚴重的菌血癥、壞死性小腸結腸炎以及腦膜炎等疾病。與其他食源性致病菌相比，該菌感染率不高，但對于特殊人群有高達40％—80％致死率。在克羅諾桿菌屬中克羅諾桿菌、丙二酸鹽陽性克羅諾桿菌和蘇黎世克羅諾桿菌這三個種與嬰幼兒感染相關疾病具有非常緊密的聯系。同時，在國際相關微生物檢測標準中也明確指出克羅諾桿菌在PIF中是不能被檢出的，在2002年，國際食品微生物委員會將克羅諾桿菌列為“可對特定人群造成生命威脅”的一種食源性致病微生物。因此，建立一種快速檢測嬰兒配方乳粉中克羅諾桿菌屬的方法對乳粉生產企業以及消費者都具有非常重要的意義。

目前，對沙門氏菌、克羅諾桿菌的檢測方法主要有以培養為基礎的傳統微生物學法、基于抗原抗體的免疫學檢測方法和分子生物學檢測法，如核酸探針技術、聚合酶鏈式反應(PCR)和等溫擴增技術等。傳統的微生物學方法需要極長的檢測時間和極繁瑣的檢測步驟，并不適合于當代快速生活和生產的節奏，所以該方法不能滿足食源性致病菌快速檢測的需求，因此迫切需要一種操作簡單、快速的檢測技術。

發明內容

本發明的目的是為了解決利用傳統微生物學等檢測致病菌方法中存在的問題，實現同時檢測克羅諾桿菌和沙門氏菌。

本發明提供了一種同時檢測克羅諾桿菌和沙門氏菌的引物組合，所述引物組合由以下序列組成：

SEQ ID NO:1所示序列：AGAAGCTTTTCAGAAGAGGA；

SEQ ID NO:2所示序列：GATAATAGCTTTACTCGTTGTACT；

SEQ ID NO:3所示序列：

CTGCCTGAGGAATAACCATTTCTATAATAAAGGCTTGGTTAGAAGACA GACA；

SEQ ID NO:4所示序列：

TACGACTGGGATATGAACGGGACTCATGTCAATAACTACATCAG；