[發(fā)明專(zhuān)利]一種提高重組膠原蛋白生產(chǎn)水平的發(fā)酵工藝

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110999056.2
• 申請(qǐng)日: 2021-08-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113789358B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周浩;郝東;王俊;魏文培;侯增淼
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 西安德諾海思醫(yī)療科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12P21/02
• 分類(lèi)號(hào): C12P21/02;C12N1/38;C12N1/16;C12R1/84
• 代理公司: 成都睿道專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 51217
• 代理人: 許立

1.一種提高重組膠原蛋白生產(chǎn)水平的發(fā)酵方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：將畢赤酵母工程菌接種于種子罐中培養(yǎng)，待溶氧大幅度回升后補(bǔ)加甘油和補(bǔ)料培養(yǎng)基，待濕重增至大于100g/L時(shí)，移種至發(fā)酵罐中開(kāi)始發(fā)酵培養(yǎng)；

S2：將發(fā)酵罐內(nèi)的畢赤酵母工程菌培養(yǎng)至溶氧大幅度回升后，使用碳源培養(yǎng)基和補(bǔ)料培養(yǎng)基進(jìn)行混合碳源補(bǔ)料，待物料濕重增至大于150g/L時(shí)，停止混合碳源補(bǔ)料；

S3：碳源耗盡后，加入甲醇和補(bǔ)料培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)至發(fā)酵結(jié)束；

畢赤酵母工程菌，其保藏編號(hào)為，CGMCC?No.20458；

所述步驟S1中種子罐和發(fā)酵罐中使用的畢赤酵母工程菌發(fā)酵培養(yǎng)基包括以下濃度的組分：CaSO₄·2H₂O?0.47~1.175g/L，K₂SO₄?7.28~18.2g/L，MgSO₄·7H₂O?5.96~14.9g/L，KOH1.625~4.13g/L，甘油?20.0~40.0g/L；葡萄糖20.0~40.0g/L；(NaPO₃)_6?6.5~13.0g/L，白色玉米漿干粉3~7g/L；

所述補(bǔ)料培養(yǎng)基包括以下濃度的組分：CaSO₄·2H₂O?0.1~0.705g/L；K₂SO₄?0.15~10.92g/L；MgSO₄·7H₂O?0.25~8.94g/L；KOH?0.12~2.478g/L；白色玉米漿干粉0.3~4g/L；

所述步驟S2中碳源培養(yǎng)基為甘油、葡萄糖或甘油和葡萄糖混合培養(yǎng)基；

所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件為：發(fā)酵溫度28~32℃，氨水調(diào)節(jié)pH為4.8～5.5，誘導(dǎo)表達(dá)前溶氧不低于30%，罐壓0.04~0.06MPa，誘導(dǎo)表達(dá)后溶氧不低于5%，罐壓0.08~0.1MPa。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高重組膠原蛋白生產(chǎn)水平的發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟S1中種子罐和發(fā)酵罐中使用的畢赤酵母工程菌發(fā)酵培養(yǎng)基包括以下濃度的組分：CaSO₄·2H₂O?0.5875~0.8225g/L，K₂SO₄?9.1~12.74g/L，MgSO₄·7H₂O?7.45~10.43g/L，KOH2.07~2.891g/L，甘油?20.0~30.0g/L；葡萄糖20.0~30.0g/L；(NaPO₃)₆?6.5~9.1g/L，白色玉米漿干粉3~5g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高重組膠原蛋白生產(chǎn)水平的發(fā)酵方法，其特征在于，所述補(bǔ)料培養(yǎng)基包括以下濃度的組分：CaSO₄·2H₂O?0.25~0.5875g/L；K₂SO₄?5.46~9.1g/L；MgSO₄·7H₂O?4.47~7.45g/L；KOH?0.75~2.065g/L；白色玉米漿干粉2.1~3.5g/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高重組膠原蛋白生產(chǎn)水平的發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟S2中補(bǔ)料培養(yǎng)基的流加速率為5~8mL/h/L，碳源培養(yǎng)基的流加速率為8~15mL/h/L；所述步驟S3中補(bǔ)料培養(yǎng)基的流加速率為3~5mL/h/L，甲醇的流加速率為3~7mL/h/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高重組膠原蛋白生產(chǎn)水平的發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟S1中補(bǔ)料培養(yǎng)基的流加速率為5~8mL/h/L，甘油的流加速率為10~18mL/h/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高重組膠原蛋白生產(chǎn)水平的發(fā)酵方法，其特征在于，所述步驟S1中將畢赤酵母工程菌培養(yǎng)至濕重增至160~180g/L時(shí)，移種至發(fā)酵罐；所述步驟S2中將畢赤酵母工程菌培養(yǎng)至濕重增至180~200g/L后停止混合碳源補(bǔ)料。