[發明專利]一種快速提取細胞外囊泡的富集、純化、收集裝置

在審

• 申請號: 202110993258.6
• 申請日: 2021-08-27
• 公開（公告）號: CN114164083A
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 崔大祥;彭家偉;梁輝;周誠
• 申請（專利權）人: 上海納米技術及應用國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: C12M1/24
• 分類號: C12M1/24;C12M1/12;C12M1/00;C12N5/0775
• 代理公司: 上海東亞專利商標代理有限公司 31208
• 代理人: 董梅

1.一種快速提取細胞外囊泡的富集、純化、收集裝置，其特征在于，包括由濾膜（4）、上、下富集外管（12）、（13）、超濾膜（7）和超濾膜管（14）組成的核心部件，所述的超濾膜設在超濾膜管（14）內并與超濾膜管（14）形成5-40°的夾角，在保證濾液流體培養基中細胞外囊泡（EVs）過濾效率的同時，防止被攔截的EVs在超濾膜表面不斷積累，造成濾孔的堵塞從而形成“死濾”；所述的超濾膜管（14）通過上、下端接口（15）、(16)與上、下富集外管（12）（13）緊密連接，形成中空管狀的富集容器；在所述的上富集外管（12）的頂端設有安裝濾膜（4）的進液口（3），側面設在收集口（5）；在所述的下富集外管（13）的底端設有安裝了單通閥（10）的出液口（11）。

2.根據權利要求1所述的快速提取細胞外囊泡的富集、純化、收集裝置，其特征在于，所述濾膜（4）孔隙為0.22μm-0.45μm。

3.根據權利要求1所述的快速提取細胞外囊泡的富集、純化、收集裝置，其特征在于，所述超濾膜管（14）內的超濾膜（7）孔徑范圍為10 nm-400 nm，以滿足流體培養基（8）自由通過而截留包含的EVs（6），實現EVs（6）的快速富集濃縮。

4.根據權利要求1或3所述的快速提取細胞外囊泡的富集、純化、收集裝置，其特征在于，所述超濾膜（7）與超濾膜管（14）軸向的夾角為20°。

5.根據權利要求1所述的快速提取細胞外囊泡的富集、純化、收集裝置，其特征在于，各部件均拆卸式連接，防止污染以及長期使用造成的培養物黏附堵塞，其中，超濾膜管（14）通過兩端接口可拆卸的與富集外管緊密連接，形成中空管狀的富集容器，所述富集容器容積為5 mL -50 mL。

6.一種根據權利要求1至5任一項所述的快速提取細胞外囊泡的富集、純化、收集裝置的使用方法，其特征在于，采用注射器（1）或移液管將包含臍帶間充質干細胞（9）及EVs（6）流體培養基（2）經濾膜（4）自上富集外管（12）頂部的進液口（3）送入富集容器內，經過超濾膜（7）的切向流過濾，富集容器內的流體培養基（8）自超濾膜（7）流向下富集外管（13）內，不僅起到超濾截留作用，同時也會沖帶走超濾膜（7）表面截留的EVs（6），在上富集外管（12）的內部得到富集的EVs（6），從收集口（5）收集富集的EVs（6），或繼續對富集的EVs（6）純化。

7.根據權利要求6所述的快速提取細胞外囊泡的富集、純化、收集裝置的使用方法，其特征在于，當富集容器內流體培養基（8）中EVs（6）富集后，打開出液口（11）處的單通閥（10），待流體培養基（8）從出液口（11）排盡時，采用注射器（1）或移液管將緩沖液PBS（17）自進液口（3）送入富集容器內，沖洗富集EVs（6），將裝置內殘留的培養基從出液口（11）帶出，緩沖液PBS（17）對富集的EVs（6）進行二次以上的過濾沖洗后，純化后的EVs（6）富集在上富集外管（12）內，實現對富集EVs（6）的純化。

8.根據權利要求7所述的快速提取細胞外囊泡的富集、純化、收集裝置的使用方法，其特征在于，所述富集EVs（6）純化后，在最后一次沖洗前，將單通閥（10）關閉，使得富含EVs（6）的PBS充滿上、下富集外管（12）（13）內部，隨后用注射器或者移液槍從收集口（5）處盡可能收集上富集外管（12）內部的PBS（18），即可得到高濃度、高純度EVs（6）的PBS溶液。