[發明專利]一種與奶牛酮病相關的血液中編碼基因SOD及其PCR檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202110992400.5
• 申請日: 2021-08-27
• 公開（公告）號: CN113481221A
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 徐闖;孫旭東;李卓;姜春暉;董志昊;常仁旭;羅勝繽;唐燕;宋倩;高爽;董昊;王旋
• 申請（專利權）人: 黑龍江八一農墾大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12Q1/6888
• 代理公司: 大慶禹奧專利事務所 23208
• 代理人: 朱林;楊立芹

本發明涉及一種奶牛血液中與酮病相關的編碼基因SOD，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。本發明還涉及了用于快速檢測奶牛血液中與酮病相關的編碼基因SOD的PCR檢測試劑盒以及該試劑盒的用途。本發明通過廣泛而深入的研究，檢測出了在酮病奶牛血液中存在SOD基因，即酮病奶牛血液中含有143bp核苷酸序列的SOD基因，以特異性引物通過PCR技術驗證了SOD基因在奶牛機體不同狀態下的含量；本發明的試劑盒能用于快速高通量的檢測出奶牛血液中SOD基因，可作為奶牛酮病氧化應激傳統檢測的輔助方法，并為奶牛酮病氧化應激的檢測與實驗室診斷提供了簡單快速、重復性好的新方法。

技術領域

本發明屬于動物分子生物學領域，涉及一種與奶牛酮病相關的血液中編碼基因SOD及其PCR檢測試劑盒。

背景技術

近些年來，隨著我國奶牛養殖業不斷向規模化、集約化發展，圍產期奶牛代謝性疾病的發病率也隨之增加。圍產期奶牛處于轉變時期，攝取能量達不到體內能量需求，將處于負能量平衡狀態。因此奶牛將進行體脂動員，過度的體脂動員會產生大量的非酯化脂肪酸(Nonesterified fatty acid，NEFA)和β-羥丁酸(β-hydroxybutyric acid，BHBA)致使酮病等代謝性疾病的發生。此類疾病不僅使泌乳母牛產乳量明顯下降，而且還嚴重影響產后母牛的發情配種，同時亦常常誘發皺胃變位、胎衣不下、子宮內膜炎、乳房炎等圍產期的其他疾病，對奶牛飼養業造成重大經濟損失。研究發現動物主要通過酶機制和非酶機制消除體內的自由基，其中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是最主要的酶之一，它能夠清除生物氧化過程中的超氧陰離子自由基(superoxide anion，O₂)，被認為是抗氧化系統的第一道防線。SOD是自然界最有效的防御氧化侵襲的抗氧化劑之一，SOD在消除氧化損傷中發揮了重要作用，還可以參與由病毒感染和細菌引起的免疫反應。當機體發生病變時，自由基增加，從而引發體內SOD含量的改變，脂質過氧化物進一步氧化形成脂質過氧化終產物丙二醛(Malondialdehyde MDA)。MDA可引發細胞代謝及功能的障礙，甚至死亡。當體內脂質過氧化反應增強，清除氧自由基能力減弱，則造成體內自由基反應紊亂、微循環障礙和血瘀證，從而導致胎衣不下等疾病。因此對圍產期疾病的奶牛血清中SOD含量變化進行檢測，可以為進一步探討奶牛圍產期疾病的發病機制，預防奶牛圍產期疾病提供更可靠的理論依據。

SOD的檢測主要是通過采集血液或組織細胞等樣品，分離血清蛋白、生化鑒定等傳統方法，但過程繁瑣、費力、耗時、外界影響因素多，結果不穩定。因此迫切需要一種高效、快速的檢測方法用于SOD的檢測，及時發現奶牛氧化應激的發生，針對我國奶牛養殖業的發展意義重大。

發明內容

本發明的第一目的是提供奶牛血液中與酮病相關的編碼基因SOD的核苷酸序列。

本發明的第二目的是提供一種與奶牛酮病相關的血液中編碼基因SOD的PCR檢測試劑盒，解決分離血清蛋白、生化鑒定等傳統方法繁瑣、費力、耗時、外界影響因素多，結果不穩定的問題。

本發明的第三目的是提供上述PCR檢測試劑盒的用途。

本發明通過以下技術方案來實現：

一、一種奶牛血液中與酮病相關的編碼基因SOD，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

二、一種用于快速檢測奶牛血液中與酮病相關的編碼基因SOD的PCR檢測試劑盒，所述的試劑盒中的引物序列如下：

正向引物：TGTTCTGCGGCGTCGTTTTC(SEQ ID NO.1)；

反向引物：CCTCGAAGTGGATGGTGCCT(SEQ ID NO.2)。

進一步的，所述試劑盒還含有ddH2O、2XTaq Master Mix、樣品基因組DNA提取試劑中的一種或多種。

進一步的，所述試劑盒還含有陽性對照或陰性對照中的一種或多種。