[發明專利]一種臍帶血各成分同步分離試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 202110990184.0
• 申請日: 2021-08-26
• 公開（公告）號: CN113717938A
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 王盛;齊湘杰
• 申請（專利權）人: 王盛
• 主分類號: C12N5/0781
• 分類號: C12N5/0781;C12N5/078;C12N5/071;C12N5/0783;C12N5/0786;C12N5/0787
• 代理公司: 北京識然知識產權代理事務所(普通合伙) 11975
• 代理人: 曾慶國

本發明公開了一種臍帶血各成分同步分離試劑盒，包括A號稀釋液、B1號分離液、B2號分離液、C號洗滌液、D號裂解液；A號稀釋液為0.9％生理鹽水，B1號分離液和B2號分離液分別為9％的聚蔗糖液和34％的復方泛影葡胺溶液按體積比50:19.11、50:23.28混合后的混合液，C號洗滌液為0.9％生理鹽水或pH 7.4±0.1不含Ca²⁺和Mg²⁺的PBS溶液，D號裂解液為紅細胞裂解液。本發明提供了同步分離出臍帶血血小板、紅細胞、血漿及其外泌體、中性粒細胞等成分的技術及試劑盒，可產業化，可解決臍帶血中除了造血干細胞其它成分沒有同步分離的技術問題，能極大促進臍帶血中各成分的充分利用。

技術領域

本發明涉及一種試劑盒及其使用方法，具體涉及一種臍帶血各成分同步分離試劑盒及其使用方法，是一種能夠同步分離臍帶血血小板、紅細胞、血漿及其外泌體、中性粒細胞、單核細胞、內皮祖細胞、干細胞和淋巴細胞的試劑盒，屬于臍帶血分離技術領域。

背景技術

自1988年全球首例臍帶血成功移植以來，臍帶血的應用和研究取得了巨大進展，全球臍帶血應用已超過8萬例，我國臍帶血應用也已達到1.6萬例。國際上臍帶血已用于治療100余種疾病，既包括血液病，也包括非血液病。但與之相比，我國臍帶血應用主要以血液疾病為主，應用范圍有待擴大。目前干細胞治療應用最成熟的是造血干細胞，造血干細胞的一個重要來源是臍帶血。我國衛健委批準建設的7家省級正規臍帶血庫儲存了大量臍帶血資源。臍帶血中除了造血干細胞，還有其他類型的干細胞、免疫細胞等，目前我國將臍帶血中的造血干細胞用于臨床治療，主要以血液疾病為主，而國際上臍帶血已用于治療 100多種疾病，既包括血液病，也包括非血液病。

臍帶血的T淋巴細胞發育不成熟，免疫功能也低下，但其表達的抗原以及共刺激分子與成人外周相比較并無明顯差異，經適當地刺激是可以被激活增殖的，只是增殖的時間以及過程與外周的稍有不同。基于這，臍帶血的淋巴細胞可用于腫瘤免疫細胞(CAR-T、NKT、DC細胞等)培養制備。

臍帶血的血漿也是一種很好的資源，近年來對臍帶血血漿的研究也逐漸增多。臍帶血血漿中含有抗衰老方面的GDF11因子。在細胞培養方面可用臍帶血血清代替胎牛血清，并取得非常滿意的效果。臍帶血血漿也可以用于配制細胞凍存液，凍存效果非常理想。

外泌體攜帶了來源細胞的一些生物信息分子，一直將其作為體內信息交流和傳遞的重要載體進行研究。但事實上，外泌體介導多種生物學過程，不管是免疫細胞分泌的外泌體還是非免疫細胞分泌的外泌體都在免疫調節中扮演著重要的角色，臍帶血血漿里也含有豐富的外泌體。

高濃度血小板血漿(Platelet-rich plasma，PRP)，是利用血液制作的富含血小板的高濃度血漿。人體的血小板在高濃度狀態下，能夠產具有細胞粘合功能的蛋白質，可以促進血小板大量分泌有促進傷口、組織愈合及細胞再生的多種生長因子，所以PRP也叫做富含生長因子血漿。PRP具有迅速止血、止痛、加速傷口愈合的作用，可極大程度減輕術后疤痕的形成，從上世紀九十年代中期開始，被廣泛應用于各種外科手術、心臟手術以及整形手術，目前亦廣泛用于醫學美容方面。臍帶血PRP分泌各種因子能力更強及臍血血漿富含的生長因子更強大，同一血型的臍帶血PRP止血、止痛、加速傷口愈合的作用及醫學美容方面會慢慢體現。

臍帶血內的血紅蛋白(Hb)相對于成人靜脈血中的含量高20％～50％，且含有豐富的促紅細胞生長素，能夠減少輸注血量。所以，臨床上也越來越多使用臍帶血進行輸血治療。尤其是對于易過敏群體，臍帶血無過敏原，避免了使用成人血液需要多次洗滌紅細胞的繁瑣步驟。