[發明專利]一種用于擴增甜瓜內源病毒的引物對及其應用

在審

• 申請號: 202110989147.8
• 申請日: 2021-08-26
• 公開（公告）號: CN113774164A
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發明（設計）人: 趙立群;邱艷紅;徐秀蘭;田文;張海軍;張曉飛;劉慧;溫常龍
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 榮紅穎;張洪生

本發明公開了一種用于擴增甜瓜內源病毒基因組片段的引物對，包括第一引物和第二引物；第一引物的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；第二引物的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明還公開了包括前述引物對的試劑與試劑盒及其應用。本發明還公開了使用前述引物對檢測待測植物材料是否感染甜瓜內源病毒的方法以及檢測待測病毒是否為甜瓜內源病毒的方法。前述引物對檢測甜瓜內源病毒的敏感性高，特異性好。

技術領域

本發明屬于植物病毒技術領域，涉及生物檢測技術，具體涉及基于一步法RT-PCR技術檢測甜瓜內源病毒的引物對、RT-PCR試劑、RT-PCR試劑盒及其應用和方法。

背景技術

甜瓜內源病毒(cucumis melo endornavirus，CmEV)是甜瓜上新發生的病毒病害。

近年來，甜瓜內源病毒在英國、美國、厄瓜多爾、韓國和巴西均有報道。2020年，甜瓜內源病毒在我國上海被首次報道，病毒序列與韓國發現的甜瓜內源病毒SJ1株系序列相似度高達98.31％。而且，我國發現的甜瓜內源病毒被證實可以通過種子進行傳播。有研究表明內源RNA病毒可以在植株中存在上百世代。另外，甜瓜內源病毒可在甜瓜、絲瓜等多個葫蘆科作物中被檢出，表明該病毒寄主非常廣泛。因而有必要建立該病毒的靈敏、快速精準的檢測技術,以檢測重要瓜類種子、種苗是否帶毒，以防控該病毒隨種子、種苗遠距離傳播擴散。

發明內容

本發明所要解決的技術問題為如何檢測甜瓜內源病毒、或如何檢測待測植物樣本是否感染甜瓜內源病毒。為了解決上述技術問題，本發明依據病毒編碼區設計特異性引物，可快速、精準、靈敏檢測該病毒。

本發明第一方面提供了一種用于擴增甜瓜內源病毒基因組片段的引物對，所述引物對包括第一引物和第二引物。

本發明第二方面提供了一種用于擴增甜瓜內源病毒基因組片段的試劑，所述試劑包括本發明第一方面所述的引物對。

在一些實施方式中，所述第一引物與所述第二引物的摩爾比為1:1。

在一些實施方式中，所述試劑還包括反轉錄酶和/或DNA聚合酶。

在一些實施方式中，所述試劑還包括陽性對照樣品，所述陽性對照樣品可以為感染甜瓜內源病毒的植物葉片，也可以為甜瓜內源病毒本身，還可以是人工合成的如SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列。

本發明第三方面提供了一種用于擴增甜瓜內源病毒基因組片段的試劑盒，所述試劑盒中含有本發明第一方面所述的引物對或本發明第二方面所述的試劑。

本發明第四方面提供了本發明第一方面所述的引物對、本發明第二方面所述的試劑或本發明第三方面所述的試劑盒在如下a1或a2中的應用：

a1、檢測甜瓜內源病毒；

a2、制備檢測甜瓜內源病毒的制劑；

在一些實施方式中，a1是指：

檢測待測植物材料是否感染甜瓜內源病毒；或

檢測待測病毒是否為甜瓜內源病毒；

在一些實施方式中，a2是指：

制備檢測待測植物材料是否感染甜瓜內源病毒的制劑；或

制備檢測待測病毒是否為甜瓜內源病毒的制劑。

本發明第五方面提供了一種檢測待測植物材料是否感染甜瓜內源病毒的方法，所述方法包括：

b1、采用本發明第一方面所述的引物對對所述待測植物材料的核酸進行PCR擴增；

b2、根據所述擴增的產物確定所述待測植物材料是否感染甜瓜內源病毒。

在一些實施方式中，所述待測植物材料為甜瓜葉片或甜瓜種子。